本文關(guān)鍵詞：A型流感病毒通用型人源化抗體的構(gòu)建及初步鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備A型流感病毒通用型人源化抗體并進(jìn)行鑒定。方法通過文獻(xiàn)檢索、蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫(Swissprot)、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(PBD)等獲得抗流感抗體的序列信息,經(jīng)計算機(jī)分析軟件InsightⅡ分析抗體結(jié)構(gòu),采用分子模擬、分子對接等方法分析抗體的輕、重鏈可變區(qū)基因結(jié)構(gòu),用昆蟲細(xì)胞偏嗜密碼子優(yōu)化氨基酸序列,合成抗流感病毒抗體輕、重鏈可變區(qū)基因;對合成氨基酸序列中的輕、重鏈可變區(qū)基因作酶切鑒定,將輕鏈可變區(qū)基因與桿狀病毒表達(dá)載體PAC-κ-CH3連接,構(gòu)建PAC-κ-L-CH3,酶切合成的重鏈可變區(qū)基因與PAC-κ-L-CH3連接,構(gòu)建PAC-κ-L-H-CH3重組表達(dá)載體,鑒定正確后,同桿狀病毒DNA共轉(zhuǎn)染至昆蟲細(xì)胞(sf9)中,于27℃用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng),收集上清,應(yīng)用各亞型流感病毒株滅活后進(jìn)行血凝抑制試驗和ELISA試驗,檢測制備的抗體對流感病毒的通用性;通過熒光抗體試驗檢測抗體在細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果重組桿狀病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染sf細(xì)胞后,傳代上清中檢測到抗體;血凝抑制試效價為1，

本文編號：495852