本文關(guān)鍵詞：KCNJ11基因E23K基因多態(tài)對(duì)細(xì)胞膜電流的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:KCNJ11基因E23K多態(tài)與心血管疾病、糖尿病等相關(guān)聯(lián),本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究人KCNJ11基因外顯子處E23K多態(tài)對(duì)細(xì)胞膜電流密度的影響,探討其與相關(guān)疾病關(guān)聯(lián)的機(jī)制。方法:普通PCR法擴(kuò)增KCNJ11基因外顯子,重疊延伸PCR法使多態(tài)位點(diǎn)G※A突變,基因重組法將KCNJ11基因外顯子(分別含23E和23K等位基因)插入pcDNA3.1/CT-GFP真核表達(dá)載體,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法分別將重組質(zhì)粒pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),檢測(cè)轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒的細(xì)胞膜電流密度。結(jié)果:PCR擴(kuò)增獲得長(zhǎng)度為1 173 bp的KCNJ11基因外顯子,成功構(gòu)建pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)重組表達(dá)載體。全細(xì)胞膜片鉗檢測(cè)結(jié)果顯示,兩組轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞表面均檢測(cè)到正電流和負(fù)電流,細(xì)胞表面翻轉(zhuǎn)電壓均為50mV。兩組細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KCNJ11(E)質(zhì)粒的細(xì)胞表面電流明顯高于轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-KCNJ11(K)質(zhì)粒的細(xì)胞(P0.05,n=10)。結(jié)論:KCNJ11基因外顯子E23K多態(tài)能導(dǎo)致細(xì)胞膜電流發(fā)生改變,為進(jìn)一步研究多態(tài)位點(diǎn)與相關(guān)疾病的關(guān)聯(lián)機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 蘭州城市學(xué)院;蘭州大學(xué)第一醫(yī)院;北京體育大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： KCNJ 基因多態(tài)性 膜片鉗 細(xì)胞膜電流
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(31071032)
【分類(lèi)號(hào)】：R363.1
【正文快照】： KCNJ11基因編碼內(nèi)向整流型鉀離子通道蛋白Kir6.2,主要存在于心肌、骨骼肌、胰腺β-細(xì)胞、腦神經(jīng)元等處[1,2]。細(xì)胞內(nèi)ATP/ADP的變化、4,5-二磷酸肌醇以及長(zhǎng)鏈乙酰輔酶A均能激活該通道。在運(yùn)動(dòng)過(guò)程中,能合理調(diào)節(jié)心臟對(duì)外界應(yīng)急反應(yīng)的適應(yīng)能力,被認(rèn)為是心臟的能量感受器。KCNJ11

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本文編號(hào)：488510