本文關(guān)鍵詞：人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:建立高純度的人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)體系對研究胎盤功能是十分必要的。目前,國內(nèi)外研究多采用三步酶消化法結(jié)合免疫磁珠法分離胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞,然而步驟過于繁瑣且對細(xì)胞損傷較大。因而,如何簡化人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離步驟,同時(shí)又能提高目標(biāo)細(xì)胞純度的體外培養(yǎng)方法成為研究熱點(diǎn)。目的:探索一種簡便高效的從早期絨毛組織中分離人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,觀察細(xì)胞生長狀態(tài)并進(jìn)行鑒定。方法:利用健康孕6-8周孕婦行人工流產(chǎn)后的絨毛組織,經(jīng)兩步酶消化法和非連續(xù)Percoll密度梯度離心得到人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞,傳代時(shí)利用胰酶消化法和反復(fù)貼壁法對細(xì)胞進(jìn)行純化。結(jié)果與結(jié)論:實(shí)驗(yàn)成功獲取人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞,原代培養(yǎng)的人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞在培養(yǎng)24 h后基本完全貼壁,第10天進(jìn)入對數(shù)生長期,第12至13天細(xì)胞濃度達(dá)80%,傳代細(xì)胞較原代細(xì)胞生長活躍,培養(yǎng)5-7 d可長滿培養(yǎng)瓶底,呈"鋪路石樣"排布。免疫熒光化學(xué)結(jié)果顯示,培養(yǎng)的細(xì)胞中FⅧ因子與CD31相關(guān)抗原雙熒光染色呈陽性,細(xì)胞陽性率達(dá)100%。MTT法測得培養(yǎng)第5代人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長曲線呈倒"S"形。結(jié)果證實(shí),應(yīng)用兩步酶消化法、非連續(xù)Percoll密度梯度離心法分離細(xì)胞,并利用胰酶消化法和反復(fù)貼壁法純化細(xì)胞,可獲得大量高純度的人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院婦產(chǎn)科;廣州市重癥孕產(chǎn)婦救治中心;廣州市婦產(chǎn)科研究所;廣州醫(yī)科大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 組織工程 血管內(nèi)皮細(xì)胞 人胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞 早期絨毛組織 原代培養(yǎng) 免疫細(xì)胞熒光化學(xué) 細(xì)胞鑒定 胰酶消化 純化 FⅧ因子相關(guān)抗原 CD MTT法 國家自然科學(xué)基金
【基金】：廣東省自然科學(xué)基金(S2012010008932) 國家自然科學(xué)基金(81370775,81302399) 教育部項(xiàng)目基金(20114423110004)~~
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction胎盤對胎兒的正常發(fā)育起著至關(guān)重要的作用,而良好的胎盤血管網(wǎng)絡(luò)的形成,是維持正常妊娠的前提。研究顯示,胎盤功能障礙與不良妊娠結(jié)局密切相關(guān),如胎兒生長受限、胎兒宮內(nèi)窘迫及早產(chǎn)等[1-3]。有鑒于此,通過建立體外胎盤模型來研究胎盤功能勢在必行。作為胎盤

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9 彭文,江森,戴e

本文編號(hào)：464064