本文關(guān)鍵詞：日本腦炎病毒NS3蛋白酶活性檢測(cè)及抑制劑高通量篩選方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是單股正鏈RNA病毒,全基因組僅含有一個(gè)開放閱讀框,編碼一條多聚蛋白前體,病毒編碼的NS3蛋白酶在JEV多聚蛋白加工過程中起著重要作用,是重要的藥物靶標(biāo)。通過PCR擴(kuò)增了NS2BH-NS3蛋白酶的編碼區(qū),構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到可溶性的NS3蛋白酶,用鎳親和層析方法進(jìn)行了純化。建立了基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移的NS3蛋白酶活性檢測(cè)方法,并確定了最佳的反應(yīng)條件,對(duì)113個(gè)化合物進(jìn)行了篩選,發(fā)現(xiàn)其中兩個(gè)化合物對(duì)JEV NS3蛋白酶具有一定的抑制活性。本研究為JEV NS3蛋白酶的活性研究及抑制劑篩選提供了一種操作方便、成本低廉的方法。
【作者單位】： 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 日本腦炎病毒 NS蛋白酶 可溶性表達(dá) 酶活性 抑制劑高通量篩選
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.30800831) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(863計(jì)劃)(No.2011AA10A212)資助~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 日本腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是由蚊蟲媒介傳播的嗜神經(jīng)病毒,為黃病毒科黃病毒屬成員之一。JEV主要在亞洲流行并造成較大的危害[1-2],其感染豬后導(dǎo)致母豬流產(chǎn),產(chǎn)死胎、木乃伊胎等繁殖障礙,公豬多發(fā)生睪丸炎,給我國的養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[3]。同時(shí)JEV可

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2 張映新;李素霞;楊梓;袁勤生;;重組羧肽酶原B在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及活性羧肽酶B的純化[J];藥物生物技術(shù);2006年02期

3 王春艷;郝軍元;張英波;王諾;張玉靜;;凋亡素融合基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及可溶性表達(dá)[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2007年03期

4 杜翠紅;曹敏杰;游品升;高體琪;;人內(nèi)皮抑素基因的定點(diǎn)突變及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2009年05期

5 孫晉華,洪岸,張玲,孫奮勇,宋照雷;大腸桿菌可溶性表達(dá)人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的研究[J];微生物學(xué)報(bào);2003年04期

6 鄭斌;溫進(jìn)坤;史建紅;韓梅;;hhLIM的表達(dá)及其在F肌動(dòng)蛋白交聯(lián)中的作用[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2006年05期

7 張英波;王春艷;郝軍元;張玉靜;;凋亡素融合蛋白的可溶性表達(dá)及活性分析[J];生物技術(shù);2006年06期

8 潘煦文;;胰島激活蛋白B聚體的各亞基克隆及表達(dá)的初步研究[J];新疆農(nóng)業(yè)科學(xué);2007年03期

9 陳丹;胡又佳;朱春寶;朱寶泉;;頂頭孢霉乙酰轉(zhuǎn)移酶的可溶性表達(dá)優(yōu)化和酶動(dòng)力學(xué)[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2007年09期

10 汪洋;馬明浩;馮震;吳葉林;張緒瑛;金明飛;黃靜;吳自榮;;重組人谷氨酸脫羧酶65的表達(dá)及活性研究[J];中國生物工程雜志;2009年04期

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1 孫恩成;楊濤;徐青元;耿宏偉;王凌鳳;蔡緒禹;趙晶;秦永麗;魏鵬;王文世;步志高;吳東來;;西尼羅病毒C基因可溶性表達(dá)與抗原性鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第八次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

2 鄭其升;楊松;徐學(xué)清;張曉勇;曹瑞兵;陳德勝;陳溥言;;日本腦炎病毒SA14-14-2株E基因抗原域Ⅲ的克隆及高效表達(dá)[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

3 孟先明;潘艷;蔡新斌;陸專靈;梁湘;唐海波;楊劍;張紅普;羅廷榮;;狂犬病病毒ERA株P(guān)蛋白的可溶性表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

4 仇華吉;金吉東;田志軍;周艷君;王云峰;童光志;;NS 2A序列不利于日本腦炎病毒NS1基因的體外表達(dá)[A];豬的重要傳染病防治研究新成果——中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第五屆理事會(huì)第二次全體會(huì)議暨防檢疫專業(yè)委員會(huì)第7次學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2002年

5 馮怡;馬清鈞;;人內(nèi)皮抑素基因的克隆以及在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)研究[A];中國生物工程學(xué)會(huì)第三次全國會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要集[C];2001年

6 余波;程安春;汪銘書;;提高大腸桿菌可溶性表達(dá)重組蛋白的研究進(jìn)展[A];第四屆第九次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨飼料和動(dòng)物源食品安全戰(zhàn)略論壇論文集（下冊(cè)）[C];2008年

7 徐曉健;宋長(zhǎng)征;呂麗燕;;化學(xué)分子伴侶對(duì)重組oIFN-tau在大腸桿菌中可溶性表達(dá)的影響[A];山東生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2009年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

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10 王宇光;張樹珍;;抗菌肽CMIV基因突變體的設(shè)計(jì)、合成和表達(dá)的研究[A];加入WTO和中國科技與可持續(xù)發(fā)展——挑戰(zhàn)與機(jī)遇、責(zé)任和對(duì)策（下冊(cè)）[C];2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 何紅秋;HIV-1整合酶活性檢測(cè)方法建立和應(yīng)用研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2010年

2 陳盼;人腸道病毒71型和日本腦炎病毒進(jìn)入細(xì)胞機(jī)制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

3 趙慧;重要蚊媒黃病毒在IFN-α介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的作用機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

4 李南;肺炎鏈球菌組氨酸激酶（VicK）的同源模建及其先導(dǎo)抑制劑的篩選和鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 任君萍;日本腦炎病毒受體候選分子的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

6 姜世民;D-氨甲酰水解酶可溶性表達(dá)的遺傳改造和結(jié)構(gòu)與功能研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2007年

7 趙新宇;DRR1基因的表達(dá)與功能初探以及靶向PLK1基因RNAi的抗腫瘤作用[D];四川大學(xué);2007年

8 閆飛;具有協(xié)同作用的抗氧化模擬酶的研究[D];吉林大學(xué);2010年

9 鄒柯;利用酵母三雜交系統(tǒng)篩選人胚海馬cDNA文庫以獲得能夠與FMRP發(fā)生相互作用的mRNAs[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

10 孫衛(wèi)國;DsbA-DsbA~（mut）融合蛋白作為分子伴侶在原核表達(dá)系統(tǒng)中的作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡熔;rADTZ在大腸桿菌中的可溶性融合表達(dá)、純化及其圓二色性分析[D];暨南大學(xué);2007年

2 金吉東;日本腦炎病毒NS1基因的分子克隆與高效表達(dá)[D];延邊大學(xué);2002年

3 李焱;Vero細(xì)胞膜上與日本腦炎病毒結(jié)合分子的初步篩選[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 溫鐳;重組人Hexastatin蛋白在大腸桿菌中的可溶性表達(dá)及蛋白純化[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

5 劉娜;擬除蟲菊酯類農(nóng)藥降解基因estA的可溶性原核表達(dá)及3-苯氧基苯甲酸的降解初探[D];西南交通大學(xué);2013年

6 姚晶;重組馬賓靈（MabinlinⅡ）基因在大腸桿菌中可溶性表達(dá)及其活性鑒定[D];海南大學(xué);2013年

7 任君萍;噬菌體表達(dá)短肽模擬日本腦炎病毒糖蛋白的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2001年

8 袁野;C.acetobutylicum木糖代謝途徑的改造及DCase可溶性表達(dá)的優(yōu)化[D];吉林大學(xué);2012年

9 張崇旭;金黃色葡萄球菌腸毒素B的可溶性表達(dá)及單鏈抗體庫的構(gòu)建[D];陜西師范大學(xué);2004年

10 黃朋;分子伴侶促進(jìn)SMP30蛋白可溶性表達(dá)及表達(dá)蛋白在HCC血清檢測(cè)中的作用[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

  本文關(guān)鍵詞：日本腦炎病毒NS3蛋白酶活性檢測(cè)及抑制劑高通量篩選方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：458731