本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌小分子熱休克蛋白16.3蛋白的原核表達(dá)及功能檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌小分子熱休克蛋白MTB Hsp16.3原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)、純化并初步觀察其生物學(xué)效應(yīng)。方法提取臨床H37Rv分離株基因組DNA,PCR擴(kuò)增Hsp16.3基因,將其重組到原核表達(dá)載體Pet28a中,構(gòu)建原核表達(dá)載體Pet28a-Hsp16.3,進(jìn)行雙酶切及測序鑒定。將測序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至E.coli BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行SDS-PAGE檢測,同時(shí)通過鎳柱純化試劑盒純化Hsp16.3,測定純化后蛋白濃度,并進(jìn)行Western blot法檢測。將不同濃度純化后蛋白作用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測巨噬細(xì)胞IL-10和IFN-γ的表達(dá),同時(shí)設(shè)定空白對照組及陽性對照組。結(jié)果成功構(gòu)建重組質(zhì)粒Pet28a-Hsp16.3,并在E.coli BL21(DE3)中獲得成功表達(dá),通過鎳柱純化系統(tǒng)得到純化Hsp16.3融合蛋白。qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,不同濃度純化后Hsp16.3蛋白作用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,可促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生而抑制IL-10的產(chǎn)生。結(jié)論成功克隆、表達(dá)和純化了MTB Hsp16.3蛋白,Hsp16.3能促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ,抑制IL-10的產(chǎn)生。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室 貴州省免疫學(xué)研究生教育創(chuàng)新基地;遵義醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系;
【關(guān)鍵詞】： 熱休克蛋白. 蛋白純化 巨噬細(xì)胞
【基金】：貴州省科學(xué)技術(shù)基金(黔科合J字[2008]2188) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長基金(黔科教辦[2010]04號)
【分類號】：R392.11;R378.911
【正文快照】： 結(jié)核病是一類由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB)感染引起的慢性傳染病。2011年我國結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為90萬,占全球年發(fā)病率的10.3%,位居全球第2位[1]。MTB是一種典型胞內(nèi)寄生菌,感染機(jī)體后可在巨噬細(xì)胞內(nèi)長期存活,故MTB在巨噬細(xì)胞中長期存活造成潛伏感染的相關(guān)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 師長宏;江鷹;趙勇;毛峰峰;張彩琴;白冰;張海;;結(jié)核分枝桿菌Hsp16.3蛋白影響小鼠巨噬細(xì)胞自噬形成的實(shí)驗(yàn)研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年12期

2 姚楠;董江濤;徐芳;田璽澤;吳芳;章樂;吳江東;張萬江;;結(jié)核分枝桿菌Hsp16.3與感染巨噬細(xì)胞凋亡的相關(guān)性研究[J];中國病原生物學(xué)雜志;2012年08期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 劉云霞;董偉杰;庹清章;劉丹霞;李微;張春軍;張輝;吳芳;章樂;張萬江;;結(jié)核分枝桿菌Hsp16.3對感染巨噬細(xì)胞凋亡的影響[J];石河子大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年05期

2 于翔;陸佳嘉;王秦;于曉Y，

本文編號：457268