本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型2C蛋白原核表達(dá)及抗體制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腸道病毒71型(EV71)的非結(jié)構(gòu)蛋白2C(P2C)在病毒復(fù)制周期中起著重要的作用,制備P2C的特異性抗體,對研究P2C的生物學(xué)功能以及EV71與宿主相互作用的具體機(jī)制有非常重要的意義。實(shí)驗(yàn)將2C基因克隆到原核表達(dá)載體p ET-28a(+)上,在大腸埃希菌BL21(DE3)中表達(dá)出重組蛋白r P2C,進(jìn)一步優(yōu)化原核表達(dá)條件,在溫度為30℃,誘導(dǎo)劑IPTG濃度為1 mmol/L時(shí),蛋白表達(dá)量最高,且主要以包涵體形式存在。直接將獲得的r P2C通過SDS-PAGE分離后免疫新西蘭兔,制備EV71病毒P2C的兔多克隆抗體。通過Western blot檢測,該抗體在1妣10 000稀釋比例下仍能很好地識別原核表達(dá)的r P2C。同時(shí)該抗體也能很好地檢測到EV71感染RD細(xì)胞中的P2C。因此,實(shí)驗(yàn)制備出的抗P2C抗體特異性強(qiáng)、效價(jià)高,為后續(xù)P2C功能的研究以及EV71病毒檢測提供了良好的材料。
【作者單位】： 遼寧大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院;中國科學(xué)院武漢病毒研究所病毒學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： EV病毒 C蛋白 原核表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：遼寧省教育廳資助項(xiàng)目(L2012008)
【分類號】：R373
【正文快照】： EV71病毒(Enterovirus 71,EV71)是一種重要的嗜神經(jīng)組織腸道病毒,主要感染5歲以下兒童,一年四季均有相應(yīng)病例出現(xiàn),尤其在夏秋季多發(fā)。其感染后引發(fā)疾病主要為手足口病(HFMD)和神經(jīng)源性肺水腫,此外還會(huì)引起急性無菌性腦膜炎、腦干腦炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,甚

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 榮慧;;界首市2008～2012年界首市手足口病流行特點(diǎn)分析[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2013年06期

2 溫金璇;張春梅;;小兒手足口病的護(hù)理干預(yù)效果分析[J];當(dāng)代護(hù)士(中旬刊);2014年01期

3 劉云鋒;周珍文;關(guān)銳梨;關(guān)啟鴻;駱鳴勇;周帥;;腸道病毒71型VP1基因的擴(kuò)增、克隆、表達(dá)及蛋白分析[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2014年16期

4 安紅;成芳;賈運(yùn)巧;董英;;邢臺(tái)市2009-2011年手足口病特點(diǎn)的比較[J];航空航天醫(yī)學(xué)雜志;2013年08期

5 羅日升;;手足口病患兒超敏C反應(yīng)蛋白和白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測的臨床意義[J];中國農(nóng)村衛(wèi)生;2013年07期

6 王慎玉;朱鳳才;汪華;;柯薩奇病毒A組16型研究新進(jìn)展[J];中華疾病控制雜志;2014年01期

7 徐俊;薛建;黃輝;邵雪軍;朱宏;;手足口病患兒機(jī)體免疫功能臨床研究[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年03期

8 陳聰;余春梅;王曉宇;;重組人干擾素α1b霧化治療121例手足口病療效分析[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年09期

9 施愛軍;張雪松;張小燕;;手足口病患兒血清前白蛋白和C反應(yīng)蛋白聯(lián)合檢測結(jié)果分析[J];航空航天醫(yī)學(xué)雜志;2014年06期

10 王瑤;陳國清;邵榮標(biāo);許曉慶;;鹽城市2013年手足口病病原學(xué)特征分析[J];交通醫(yī)學(xué);2014年03期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 杜加亮;高加梅;國泰;;我國人類手足口病流行病學(xué)概述[A];2013年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

2 Fang Qiaoyun;Ju Xiongfei;Liang lihuan;許岸高;;Epidemiology and etiological characteristics of hand,foot and mouth disease in Huizhou City between 2008 and 2011[A];廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)優(yōu)秀論文集[C];2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王蓓;EV71拮抗I型干擾素產(chǎn)生的分子機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

2 王驥濤;2009年河南省洛陽市、開封市手足口病病原譜研究[D];山西大學(xué);2013年

3 呂鐵鋼;腸道病毒71型感染致小鼠腦線粒體損傷及可能機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2013年

4 王曼;人類腸道病毒71型與EB病毒疫苗候選抗原在畢赤酵母中的表達(dá)及免疫原性研究[D];武漢大學(xué);2014年

5 李景良;重組柯薩奇A16病毒致病機(jī)理及候選疫苗對動(dòng)物模型致死性保護(hù)機(jī)制[D];吉林大學(xué);2014年

6 李繼安;腸道病毒71型感染對小鼠CPT2、PSGL-1和SCARB2的表達(dá)和作用的影響[D];青島大學(xué);2014年

7 杜海威;腸道病毒71型2C蛋白調(diào)節(jié)NF-κB活化的機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

8 于品;腸道病毒71型手足口病重癥發(fā)病機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

9 陳思源;維生素A營養(yǎng)對兒童抗手足口病免疫力的影響[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

10 趙淼;手足口病預(yù)防性基因工程重組疫苗的研究[D];北京工業(yè)大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁曉晶;腸道病毒71型分離鑒定及其致病機(jī)制的初步探討[D];山東大學(xué);2013年

2 許立;發(fā)展檢測腸病毒71型（EV71）感染之單克隆抗體研究[D];蘇州大學(xué);2013年

3 陳玲;甲潑尼龍琥珀酸鈉對腎上腺素致大鼠神經(jīng)源性肺水腫肺組織中的AQP5表達(dá)的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

4 呂園園;手足口病免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制及臨床診療進(jìn)展[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2013年

5 謝新星;不同腸道病毒感染致242例重型手足口臨床特點(diǎn)分析[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

6 呂秋月;大連市人腸道病毒71型病原學(xué)特征研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

7 謝振鋒;四株CoxA16病毒免疫原性及毒株間交叉保護(hù)的比較分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

8 王冠洲;EV71感染宿主中樞神經(jīng)系統(tǒng)過程中宿主因子作用的初步探究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

9 黃泓泰;兩種G20株CA16病毒顆粒的生物學(xué)特性的分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 王輝強(qiáng);刺芒柄花素抗EV71作用機(jī)制研究和EV71小鼠模型的建立[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 烏吉斯古冷;湯睿智;邢萬金;;Wistar大鼠Pdia3 cDNA的克隆及原核表達(dá)[J];生物技術(shù)通報(bào);2011年09期

2 姜海霞;劉永生;楊孝樸;陳豪泰;朱小玲;張杰;謝慶閣;;人朊蛋白基因的克隆與原核表達(dá)[J];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年03期

3 徐蕾;何永林;李娜;王瑜偉;朱道銀;;結(jié)核分枝桿菌復(fù)活促進(jìn)因子E的原核表達(dá)及純化[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年04期

4 鄭玉玲;寧保安;江華;;金黃色葡萄球菌腸毒素C的原核表達(dá)、純化及活性鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2008年04期

5 陳希曙;;小鼠激活素受體相互作用蛋白2的原核表達(dá)及抗血清制備[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2009年12期

6 卜秀娟;孟憲梅;柳增善;代平;;擴(kuò)展青霉堿性脂肪酶結(jié)構(gòu)基因的克隆與原核表達(dá)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2010年05期

7 高慎陽;查恩輝;王s，

本文編號：456561