本文關(guān)鍵詞：霍亂弧菌甘露醇-1-磷酸脫氫酶基因mtlD的克隆表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的克隆表達(dá)霍亂弧菌甘露醇特異性磷酸烯醇式丙酮酸依賴的磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)操縱子中的甘露醇-1-磷酸脫氫酶基因mtlD。方法以測序株N16961染色體為模板,聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴(kuò)增mtlD基因,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)NdeⅠ和XhoⅠ酶切后克隆入表達(dá)載體pET-30a。0.1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)表達(dá),超聲裂解上清經(jīng)Ni柱親和層析純化,比色法測定酶活性。結(jié)果 mtlD基因成功克隆入表達(dá)載體pET-30a,在宿主菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá),利用Ni親和層析柱獲得較高純度的羧基端帶His標(biāo)簽的MtlD蛋白,并具有酶活性。結(jié)論表達(dá)純化了有活性的霍亂弧菌甘露醇-1-磷酸脫氫酶,為進(jìn)一步的功能研究打下了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所;山東省疾病預(yù)防控制中心;北京友誼醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 霍亂弧菌 甘露醇--磷酸脫氫酶 mtlD
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81171640)~~
【分類號(hào)】：R378.3
【正文快照】： 甘露醇(Mannitol)是自然界分布最廣泛的六元糖醇,在藻類和許多高等植物中作為儲(chǔ)備物質(zhì)存在[1-2]。在一些真菌中,甘露醇在滲透壓調(diào)節(jié)和抵抗脅迫應(yīng)激中發(fā)揮重要作用,從而促進(jìn)菌株毒力[3-5]。通過磷酸烯醇式丙酮酸依賴的磷酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)(PEP-dependent phosphotransferase system,

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本文編號(hào)：439878