本文關(guān)鍵詞：水痘減毒活疫苗細(xì)胞工廠工藝研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過(guò)對(duì)細(xì)胞工廠工藝制備水痘減毒活疫苗的關(guān)鍵工藝參數(shù)的優(yōu)化,制備原液和成品,初步建立細(xì)胞工廠工藝,并與近年成品水痘疫苗檢定指標(biāo)相比較,評(píng)價(jià)工藝可行性和穩(wěn)定性;方法將適宜代次的人胚肺二倍體細(xì)胞(2BS株)細(xì)胞按適當(dāng)傳代比例接種至四層細(xì)胞工廠(CF4),待細(xì)胞單層后,接種47代Oka株毒種;當(dāng)病變達(dá)到5-10%時(shí),用洗滌液洗滌細(xì)胞面;當(dāng)病變達(dá)到70%以上時(shí),用EDTA消化,收集病變細(xì)胞,-70℃保存;將病變細(xì)胞破碎、澄清后,分裝凍干為成品;分別于原液和成品階段取樣進(jìn)行相關(guān)檢測(cè),并將檢測(cè)指標(biāo)與近年成品指標(biāo)進(jìn)行比較;結(jié)果確定將36代細(xì)胞以1:2傳代比例接種至CF4,3天后細(xì)胞可以穩(wěn)定達(dá)到致密單層水平;感染復(fù)數(shù)(MOI)選擇在0.01-0.001時(shí),細(xì)胞病變可達(dá)到理想水平;洗滌液選擇PBS,每層加入300-400ml,洗滌效果較好;EDTA消化液的濃度為0.05%,每層加入50ml,消化時(shí)間較為理想;收獲時(shí)將病毒收獲物在4℃條件下,1500rpm/15min回收效果理想;原液和成品疫苗檢測(cè)結(jié)果均符合當(dāng)前工藝要求;結(jié)論優(yōu)化了細(xì)胞工廠工藝的關(guān)鍵參數(shù);成功建立了水痘疫苗細(xì)胞工廠工藝;連續(xù)三批制備水痘疫苗,原液和成品均符合相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),初步證實(shí)了工藝的可行性和穩(wěn)定性。
【關(guān)鍵詞】：水痘-帶狀皰疹病毒 水痘減毒活疫苗 細(xì)胞工廠 工藝研究
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392-33
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-15
• 1 病毒簡(jiǎn)介9-10
• 2 不同毒株疫苗的研制10-12
• 2.1 Oka株及疫苗研制10-11
• 2.2 VZV_(84-7)株11
• 2.3 KMcC株11-12
• 3 水痘減毒活疫苗生產(chǎn)工藝流程12
• 4 研究進(jìn)展12-14
• 4.1 滅活疫苗12
• 4.2 多價(jià)疫苗12-13
• 4.3 亞單位疫苗13
• 4.4 以減毒VZV為載體的重組疫苗13-14
• 4.5 其他形式的疫苗14
• 5 本課題的意義14-15
• 第1章 材料與設(shè)備15-17
• 1 儀器與設(shè)備15
• 2 材料與試劑盒15-16
• 3 細(xì)胞株、毒株及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16-17
• 第2章 方法17-23
• 1 細(xì)胞復(fù)蘇17
• 2 細(xì)胞傳代17
• 3 感染17
• 4 洗滌17
• 5 收獲17-18
• 6 原液和成品檢測(cè)18-23
• 6.1 原液檢測(cè)18-19
• 6.2 成品檢測(cè)19-23
• 第3章 結(jié)果23-36
• 1 細(xì)胞工廠工藝制備水痘疫苗基本流程23
• 1.1 細(xì)胞傳代流程23
• 1.2 疫苗制備流程23
• 1.3 凍干流程23
• 2 細(xì)胞工廠工藝制備水痘疫苗關(guān)鍵參數(shù)23-28
• 2.1 傳代比例23-24
• 2.2 感染復(fù)數(shù)（MOI）24
• 2.3 洗滌液的選擇與用量24-26
• 2.4 EDTA濃度26-27
• 2.5 離心條件27-28
• 2.6 單次收獲物保存期限28
• 3 細(xì)胞工廠工藝連續(xù)三批制備水痘疫苗原液的檢定結(jié)果28-29
• 3.1 連續(xù)三批水痘疫苗原液的檢定結(jié)果28-29
• 3.2 生產(chǎn)終末代水痘病毒基因測(cè)序結(jié)果29
• 4 細(xì)胞工廠工藝連續(xù)三批制備水痘疫苗成品檢定結(jié)果29-32
• 4.1 成品疫苗的檢測(cè)結(jié)果29-30
• 4.2 其他檢測(cè)結(jié)果30-32
• 5 細(xì)胞工廠工藝連續(xù)三批水痘疫苗成品與近年均值比較結(jié)果32-36
• 5.1 成品滴度比較結(jié)果32
• 5.2 成品水分比較結(jié)果32-33
• 5.3 牛血清白蛋白殘留量比較結(jié)果33
• 5.4 抗生素殘留量比較結(jié)果33-34
• 5.5 無(wú)菌檢查比較結(jié)果34
• 5.6 支原體檢查比較結(jié)果34
• 5.7 鑒別試驗(yàn)比較結(jié)果34
• 5.8 異常毒性檢查比較結(jié)果34-35
• 5.9 熱穩(wěn)定性比較結(jié)果35-36
• 第4章 結(jié)論36-37
• 1 優(yōu)化了水痘疫苗細(xì)胞工廠生產(chǎn)工藝中的關(guān)鍵參數(shù)36
• 2 建立并完善了水痘疫苗的細(xì)胞工廠生產(chǎn)工藝36
• 3 應(yīng)用細(xì)胞工廠工藝連續(xù)三批制備成品水痘疫苗指標(biāo)合格36
• 4 細(xì)胞工廠工藝與現(xiàn)行工藝制備的水痘疫苗近年結(jié)果相近36-37
• 第5章 討論37-40
• 1 關(guān)于水痘疫苗37-38
• 2 水痘疫苗生產(chǎn)38-39
• 3 下一步工作計(jì)劃39-40
• 參考文獻(xiàn)40-46
• 致謝46

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本文編號(hào)：423350