本文關(guān)鍵詞：豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白的原核表達(dá)及其免疫反應(yīng)性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:對(duì)豬囊尾蚴AF239799-1膜聯(lián)蛋白基因進(jìn)行高效原核表達(dá),對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行免疫反應(yīng)性分析。方法:通過DNA自動(dòng)合成儀,用固相亞磷酸酰胺法合成一段5’端有NdeⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn),3’端有XhoⅠ內(nèi)切酶位點(diǎn)的豬囊尾蚴AF239799-1基因序列,并將其克隆到原核表達(dá)載體p ET28a(+)中,將其轉(zhuǎn)入到感受態(tài)大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)PCR、雙酶切及基因測(cè)序鑒定,確定陽性克隆菌。用1.0m M IPTG對(duì)陽性克隆菌進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),用SDS-PAGE(十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳)對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行鑒定,并用蛋白質(zhì)印跡法對(duì)純化后的重組蛋白進(jìn)行免疫反應(yīng)性分析。結(jié)果:合成的基因序列長(zhǎng)度為1 053 bp,AF239799-1重組蛋白為370個(gè)氨基酸,理論分子質(zhì)量、等電點(diǎn)分別為40.39 k Da和6.33;PCR、雙酶切及基因測(cè)序鑒定結(jié)果顯示,p ET28a(+)-AF239799-1重組質(zhì)粒構(gòu)建成功,并成功轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中;重組質(zhì)粒在大腸桿菌BL21(DE3)中主要以包涵體形式表達(dá);Western blot結(jié)果顯示重組蛋白可被豬帶絳蟲病豬血清識(shí)別。結(jié)論:豬囊尾蚴AF239799-1膜聯(lián)蛋白基因可在原核表達(dá)體系中獲得高效表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物具有免疫反應(yīng)性。
【關(guān)鍵詞】：豬囊尾蚴 膜聯(lián)蛋白 原核表達(dá) 免疫反應(yīng)性
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 略縮詞表7-8
• 引言8-10
• 材料與方法10-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-46
• 綜述46-54
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 作者簡(jiǎn)歷54-55
• 致謝55-56
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集56

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：豬囊尾蚴膜聯(lián)蛋白的原核表達(dá)及其免疫反應(yīng)性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：420735