交感神經(jīng)在一些疾病動物模型和老年小鼠模型組織中呈現(xiàn)發(fā)芽生長和密度增加的趨勢。這提示,交感神經(jīng)與衰老密切相關(guān)。本研究采用免疫組織化學檢測老年小鼠肝、肺、脾組織和人結(jié)腸腺瘤組織衰老模型中交感神經(jīng)標記蛋白酪氨酸羥化酶(TH)的表達情況。結(jié)果證實,衰老組織中的交感神經(jīng)密度顯著增加。然而,目前對衰老組織的這種生物學改變機制尚不明確。本研究以人成纖維細胞系2BS為實驗材料,經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測序發(fā)現(xiàn),分泌性軸突導向因子導蛋白-1在衰老細胞中上調(diào)表達。ELISA和實時定量PCR結(jié)果顯示,在博來霉素、離子射線、癌蛋白RasV12過表達所誘導的早衰及復制性衰老的2BS細胞中,導蛋白-1的蛋白質(zhì)和mRNA表達量均比年輕對照組高。DNA損傷反應(DNA damage response,DDR)是調(diào)控衰老細胞分泌蛋白質(zhì)表達的重要途徑。為明確導蛋白-1在衰老細胞的上調(diào)表達是否與DDR相關(guān),使用小分子化合物抑制DDR的重要效應分子ATM(ataxia telangiectasia mutated)和CHK2(checkpoint kinase 2)在博來霉素誘導的衰老2BS細胞中的活性。ELISA和實時定量PCR結(jié)果顯示,...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 細胞培養(yǎng)及衰老細胞的誘導
    1.3 細胞總RNA的提取及q PCR檢測
    1.4 ELISA檢測衰老細胞中導蛋白-1蛋白水平的表達
    1.5 免疫組織化學檢測交感神經(jīng)纖維 (TH+) 和衰老組織標記物
    1.6 細胞衰老特異性β-半乳糖苷酶 (SA-β-gal) 染色
    1.7 Western印跡檢測衰老細胞中EZH2蛋白含量
    1.8 CHIP和CHIP-qPCR
    1.9 大鼠DRG神經(jīng)元分離培養(yǎng)及共培養(yǎng)
    1.1 0 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 人結(jié)腸腺瘤及老年鼠組織中交感神經(jīng)支配密度增加
    2.2 軸突導向通路在衰老細胞與年輕細胞差異表達基因集中富集顯著
    2.3 軸突生長導向因子導蛋白-1在衰老細胞中上調(diào)表達
    2.4 導蛋白-1在衰老細胞中的分泌不依賴于DDR途徑
    2.5 導蛋白-1在衰老細胞中表達增加與EZH2表達下調(diào)相關(guān)
    2.6 衰老細胞通過分泌導蛋白-1調(diào)控神經(jīng)軸突生長
3 討論



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