目的:探討木香烴內(nèi)酯(Cos)對脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的小鼠原代巨噬細胞炎性小體激活和炎癥反應(yīng)的影響。方法:提取并培養(yǎng)小鼠腹腔原代巨噬細胞,用不同濃度Cos預(yù)處理巨噬細胞1 h后,1 mg/L LPS處理,分為空白對照組、模型組(單用LPS)、不同濃度(5、10和20μmol/L) Cos+LPS組; ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中TNF-α/IL-6的含量,q PCR法檢測TNF-α/IL-6 mRNA表達;為明確Cos對LPS誘發(fā)的炎癥反應(yīng)的保護機制,增加NLRP3抑制劑MCC950組(10μmol/L),LPS刺激4h、6 h,Western blot檢測NLRP3、ERK及IκB的激活,細胞免疫熒光實驗觀察NLRP3的蛋白水平。結(jié)果:與LPS組比較,LPS+Cos組TNF-α/IL-6的mRNA表達及細胞培養(yǎng)液上清TNF-α/IL-6分泌均顯著降低(P <0. 05); Western blot和細胞免疫熒光實驗結(jié)果表明,與LPS組比較,LPS+Cos組的NLRP3蛋白水平顯著降低,其抑制效果與NLRP3抑制劑MCC950相當(P <0. 05); Western bl...

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【文章目錄】：
1 材料與儀器
    1.1 材料
        1.1.1 細胞
        1.1.2 藥物與試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)及分組處理
        1.2.2 RNA的提取與實時熒光定量PCR檢測細胞炎癥因子
        1.2.3 Western blot檢測細胞ERK、IκB和NLRP3的表達與激活
        1.2.4 ELISA測細胞培養(yǎng)上清中炎癥因子的含量
        1.2.5 免疫熒光染色法觀察細胞內(nèi)NLRP3的表達
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結(jié)果
    2.1 Cos對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥因子mRNA表達的影響
    2.2 Cos對LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎癥因子分泌的影響
    2.3 Cos緩解LPS誘導(dǎo)的巨噬細胞炎性小體
    2.4 Cos緩解LPS誘導(dǎo)的ERK、IκB在巨噬細胞中的激活
3 討論



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