目的 劉德新等人已通過噬菌體抗體庫技術繞過免疫成功克隆了人抗地高辛單鏈抗體(human single-chain variable fragment of anti-Dig antibody, ADAscFv)，并使其在大腸桿菌中得到可溶性表達，目前需依據(jù)抗體性質的特點進行分離與純化。由于不同蛋白質的純化無通用策略，給制備帶來了較大難度和特殊性，本實驗的目的即通過試用不同的純化方法（鹽析、陰離子交換、凝膠過濾等），探明適合純化ADAscFv的最佳純化方法及條件，為下一步制備診斷Dig中毒的試劑盒和探明ADAscFv對Dig中毒的拮抗作用等后續(xù)研究提供實驗室依據(jù)。 方法 ①培養(yǎng)大腸桿菌(E.coli)HB2151，進行可溶性表達ADAscFv, 離心制備菌液上清，分別經酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）和聚丙烯酰氨凝膠電泳（SDS-PAGE）對表達產物進行活性及表達量的檢測。②采用不同飽和度硫酸銨分級鹽析法（SF）對上述表達物進行初步分離,分別用ELISA和SDS-PAGE法對回收的樣品進行活性及純度的檢測，確定硫酸銨的最佳飽和度及適合的溫度、沉淀所需時間等條件。③...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
論 文
    前 言
    材 料
    方法與結果、討論
        第一部分
        第二部分
        第三部分
        第四部分
        第五部分
    結 論
    參考文獻
綜 述
    正 文
    參考文獻
個人簡介
致 謝



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