本文關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌中密度感應(yīng)系統(tǒng)依賴的T6SS1調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)存在于海洋環(huán)境中的一種革蘭氏陰性菌。VP菌廣泛存在于海水、海底沉積物以及多種海洋生物中,具有致病性。在中國,大量人群由于食用未經(jīng)加工或為半生的海產(chǎn)品,會引發(fā)由VP菌引起的腸胃炎,臨床癥狀為嘔吐、腹瀉、高熱等。部分人群由于身體表面創(chuàng)傷接觸VP污染的海水或者海產(chǎn)品,還會引起傷口感染和原發(fā)性敗血癥。密度感應(yīng)系統(tǒng)(quorum-sensing,QS)是細(xì)菌之間進(jìn)行信號交流的方式,其核心調(diào)控子OpaR和AphA分別在高菌密度和低菌密度下高表達(dá),并呈反向交互式濃度梯度變化,OpaR和AphA間存在復(fù)雜的相互作用和協(xié)同效應(yīng)機(jī)制,緊密地控制著副溶血弧菌關(guān)鍵毒力基因在低菌密度下高表達(dá),并隨菌密度的升高而降低。副溶血弧菌T6SS1基因簇是位于大染色體上,是由29個基因組成的7個操縱子(VP1386-1414),選擇T6SS1基因座位中所有操縱子中首個基因作用研究的靶基因,即T6SS1的靶基因為VP1388、VP1393、VP1400和VP1409。本研究前期分別構(gòu)建AphA、ToxR和OpaR基因突變株,并通過重組獲得了His-AphA、His-ToxR和His-OpaR的重組蛋白,經(jīng)過引物延伸實驗、實時定量PCR、凝膠阻滯實驗、DNase I足跡實驗,深入探究QS系統(tǒng)核心調(diào)控子Ahp A和OpaR調(diào)控T6SS1基因轉(zhuǎn)錄的精細(xì)分子機(jī)制。獲得如下結(jié)果:1.AphA對VP1388、VP1393、VP1400和VP1409基因的轉(zhuǎn)錄具有間接負(fù)向調(diào)控作用,從而抑制T6SS1的轉(zhuǎn)錄。2.ToxR能直接與3個靶基因的啟動子區(qū)結(jié)合,分別為VP1393、VP1400和VP1409,直接負(fù)向調(diào)控T6SS1的轉(zhuǎn)錄。3.OpaR直接結(jié)合3個靶基因的啟動子區(qū),分別為VP1388、VP1400和VP1409,對T6SS1的轉(zhuǎn)錄具備負(fù)向調(diào)控作用。4.T6SS1在低菌密度下高表達(dá),主要在細(xì)菌感染的前期發(fā)揮作用,促進(jìn)對其他細(xì)菌的抑制作用,協(xié)助副溶血弧菌與其它細(xì)菌競爭。
【關(guān)鍵詞】：副溶血性弧菌 密度感應(yīng) 六型分泌系統(tǒng)Ⅰ 轉(zhuǎn)錄調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 1.文獻(xiàn)綜述7-14
• 1.1 副溶血弧菌生物學(xué)性狀7
• 1.2 副溶血弧菌的毒力因子7-9
• 1.2.1 溶血素7-8
• 1.2.2 Ⅲ型分泌系統(tǒng)8-9
• 1.3 莢膜多糖（capsular polysaccharide，，CPS）9-10
• 1.4 Ⅵ型分泌系統(tǒng)研究進(jìn)展10-11
• 1.4.1 細(xì)菌的分泌系統(tǒng)10-11
• 1.5 Ⅵ型分泌系統(tǒng)(type Ⅵ secretion system,T6SS)11-14
• 2.引言14-15
• 2.1 T6SS1研究進(jìn)展14
• 2.2 研究技術(shù)路線14-15
• 3.材料與方法15-28
• 3.1 材料15-18
• 3.1.1 菌株15
• 3.1.2 主要分子生化試劑和試劑盒15
• 3.1.3 化學(xué)試劑、藥品及溶液的配制15-17
• 3.1.4 主要使用的儀器17
• 3.1.5 引物匯總17-18
• 3.2 方法18-28
• 3.2.1 OpaR、ToxR與AphA蛋白表達(dá)與純化18-19
• 3.2.2 凝膠遷移阻滯實驗（electrophoretic mobility shiftassays，EMSA）19-21
• 3.2.3 DNaseⅠ足跡實驗（DNaseⅠ Footprinting）21-23
• 3.2.4 測序反應(yīng)23-24
• 3.2.5 引物延伸實驗（Primer extension assays）24-26
• 3.2.6 qRT-PCR實驗26-28
• 4.結(jié)果與分析28-42
• 4.1 結(jié)果28-41
• 4.1.1 靶基因的選擇28
• 4.1.2 靶基因啟動子區(qū)預(yù)測28-29
• 4.1.3 AphA對T6SS1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制29-32
• 4.1.4 ToxR對T6SS1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制32-36
• 4.1.5 OpaR對T6SS1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制36-40
• 4.1.6 菌密度40-41
• 4.2 討論41-42
• 5.結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 致謝45-46
• 個人簡歷46
• 碩士期間發(fā)表論文情況46

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：副溶血性弧菌中密度感應(yīng)系統(tǒng)依賴的T6SS1調(diào)控機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：400693