甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)是C型凝集素超級家族中膠凝素家族成員。它可選擇性識別多種病原體表面的糖結(jié)構(gòu)，以不依賴抗體和C1q的方式激活補體，發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能，還能與吞噬細胞膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用。已發(fā)現(xiàn)3個可引起免疫缺損的MBL結(jié)構(gòu)基因點突變——CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA，其編碼產(chǎn)物氨基酸均發(fā)生改變，可導(dǎo)致血清MBL水平低下。這些等位基因為常染色體共顯性遺傳，人群中其基因頻率高得令人驚奇，最高者竟達0.29，我國漢族GGC54GAC頻率約0.1。顯然，MBL缺損是迄今所發(fā)現(xiàn)的最常見的免疫缺損病。人群中不明原因反復(fù)感染的發(fā)病率很高，其最可能病因就是MBL基因突變引起的免疫缺損，但發(fā)病機理未明。 本實驗室近幾年的工作主要是MBL缺損，其中一個重要方面就是MBL缺損發(fā)病機理的研究，意欲重點闡明2個問題：MBL基因突變?nèi)绾我鹧錗BL水平低下?突變MBL蛋白的功能有否缺陷? 本實驗以GGC54GAC MBL突變?yōu)檠芯繉ο�，選用真核表達質(zhì)粒pCI-neo，根據(jù)已構(gòu)建好的含54位密碼子突變型MBL...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖254位密碼突變型MBL基因的PCR產(chǎn)物Fig.2PCRProduetofPGEM一MBLD

54位密碼突變型MBL基因的ig.2PCRProduetofPGEM一MRI+Hind111marker，2:PCRProduet粒及其酶切鑒定l雙酶切PCR產(chǎn)物、PCI一neo質(zhì)一blue，獲得30多陽性克隆，經(jīng)Sa圖3，可見約5.4kb和763bP的為54位密碼突變MBL基因....

圖3pCI一neo一MBL54的pCR及酶切鑒定

圖254位密碼突變型MBL基因的PCR產(chǎn)物Fig.2PCRProduetofPGEM一MBLDdaDNA尼eoRI+Hind111marker，2:PCRProduetofPGEM一MBLo二)重組質(zhì)粒及其酶切鑒定Sall、Smal雙酶切PCR產(chǎn)物、PCI一neo質(zhì)粒，T4連接酶....

圖4pel一neo一MBLs4質(zhì)粒酶切鑒定Fig.4TherestrietionmaPofPCI一neo一MBL54

andPCI一neoDNA甩eoRI+Hind111Marker，2:ProductofPGEM一MBL54L54/Sall+Smal，4:PCI一neo，5:PCI一neo一MBL54，6:PCI一MBL54/Sall，8:lambdaDNA尼eoRI+Hind111marke....

圖5脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染前的csoaw細胞Fig:SCHO-dhfrce山before加nsfeetion

二、細胞轉(zhuǎn)染復(fù)蘇cHo一dhfr‘細胞，培養(yǎng)至活力最佳狀態(tài)，計數(shù)1一3xl護個細胞轉(zhuǎn)入6孔板中培養(yǎng)，待80%貼壁生長(約12h，見圖5)，取約10雌重組質(zhì)粒pCI一neo一MBL54DNA(約5林l)和10協(xié)1Lipofectamine，同時作不加質(zhì)粒的CHO一dhfr’細胞轉(zhuǎn)染....

本文編號：3964094