目的:通過沉默大鼠骨髓間充質干細胞(BMMSCs)干擾素γ受體(IFN-γR)基因表達,研究抑制IFN-γ信號通路對大鼠BMMSCs免疫調節(jié)能力的影響。方法:根據大鼠IFN-γR基因序列,構建沉默IFN-γR基因的重組慢病毒shIFNγR-LV,并轉染大鼠BMMSCs,沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表達;混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗分別檢測對照組、BMMSCs陰性對照(BMMSC-NC)組和BMMSC-shIFNγR組淋巴細胞的活力和炎癥因子濃度。結果:構建的慢病毒shIFNγR-LV能顯著降低大鼠BMMSCs的IFN-γR mRNA表達;混合淋巴細胞培養(yǎng)實驗顯示,相對BMMSC-NC組,BMMSC-shIFNγR組抑制淋巴細胞活力的作用減弱(P<0.05)。混合淋巴細胞培養(yǎng)體系中,BMMSC-NC組腫瘤壞死因子α濃度低于BMMSC-shIFNγR組,而白細胞介素10濃度高于BMMSC-shIFNγR組(P<0.05)。結論:利用RNA干擾技術能有效沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表達,并能顯著降低BMMSCs的調節(jié)免疫功能。

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【文章目錄】：
材 料 和 方 法
    1 動物及細胞
    2 主要試劑
    3 主要方法
        3.1大鼠BMMSCs的分離、培養(yǎng)和鑒定
        3.2目的干擾片斷的選擇
        3.3 sh IFNγR-LV慢病毒載體的構建
        3.4慢病毒滴度測定
        3.5慢病毒感染大鼠BMMSCs
        3.6慢病毒感染大鼠BMMSCs后IFN-γR mRNA的real-time PCR檢測
        3.7 BMMSCs和脾淋巴細胞的混合培養(yǎng)
        3.8標本的收集和檢測
    4 統(tǒng)計學處理
結 果
    1 shIFNγR-LV慢病毒載體的構建
    2 shIFNγR-LV慢病毒滴度測定
    3 慢病毒穩(wěn)定轉染大鼠BMMSCs
    4 shIFNγR-LV下調BMMSCs的IFN-γR mRNA表達
    5 混合淋巴細胞反應
    6 混合淋巴細胞反應系統(tǒng)TNF-α和IL-10濃度的分析
討 論



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