目的：克隆桂北五步蛇金屬蛋白酶及酶原基因，并對其進(jìn)行序列分析。 方法：從桂北五步蛇毒腺中抽提總RNA，利用不同的引物，采用一步法（RT-PCR和PCR在同一管內(nèi)進(jìn)行）擴(kuò)增出不同的DNA條帶，利用平端連接的方法將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物克隆至pGEM-T Easy 載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109，挑選白色菌落提取質(zhì)粒，用PCR對其進(jìn)行鑒定，直接利用純化PCR產(chǎn)物或提取陽性菌落質(zhì)粒進(jìn)行測序。 結(jié)果：其中一對引物擴(kuò)增得到一600 bp產(chǎn)物；另一對引物擴(kuò)增得到三條特異性的DNA條帶，大小分別為1.5 Kb、1.3 Kb和800 bp，將600 bp 和800 bp DNA進(jìn)行克隆及測序，并推導(dǎo)編碼的氨基酸序列。 結(jié)論：600 bp產(chǎn)物和已報(bào)道的皖南五步蛇纖溶酶金屬蛋白酶氨基酸序列相比較，有90.6%的同源性；800 bp產(chǎn)物中信號肽及前肽和已報(bào)道的皖南五步蛇金屬蛋白酶很相似，同源性為97.9%，但僅含有部分金屬蛋白酶成熟肽的氨基酸序列，推測此片段為廣<WP=6>西五步蛇金屬蛋白酶原基因的一部分。

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖5蛇毒降纖酶組玻璃體腔免疫組化ⅣC染色×400

圖5　蛇毒降纖酶組玻璃體腔免疫組化ⅣC染色　　×400參考文獻(xiàn):[1]譚曾魯,周柔麗.醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)[M].北京:北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1992:135.[2]FASTENBERGDM,DIDDIEKR,DOREYK,etal.Ther....

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