目的:用結(jié)核分枝桿菌特異性抗原Rv2029構(gòu)建結(jié)核重組疫苗(BCG-Rv2029),在C57BL/6小鼠體內(nèi)評估其免疫效應(yīng),并初步探討其免疫機(jī)制。方法:PCR擴(kuò)增基因Rv2029,構(gòu)建重組質(zhì)粒pMV261-Rv2029,轉(zhuǎn)入卡介苗感受態(tài)細(xì)胞中,誘導(dǎo)表達(dá)并純化Rv2029蛋白。以重組的rBCG-Rv2029c活疫苗為免疫原,皮下免疫C57BL/6小鼠,間接ELISA方法檢測小鼠血抗原特異性IgG、IgG1和IgG2a抗體滴度水平,XTT檢測脾淋巴細(xì)胞抗原特異性增殖反應(yīng),流式細(xì)胞儀觀察CD4⁺T和CD8⁺T細(xì)胞比例變化,IFN-γ、IL-2檢測試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)胞因子表達(dá)水平。結(jié)果:成功構(gòu)建重組疫苗BCG-Rv2029C,并誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白。經(jīng)免疫小鼠后,重組卡介苗rBCG-Rv2029c能誘導(dǎo)較BCG更高的IgG、IgG1和IgG2a抗體滴度水平,IgG2a/IgG1的變化提示rBCG-Rv2029c可誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)。與BCG相比,rBCG-Rv2029c可誘導(dǎo)產(chǎn)生更強(qiáng)的特異性細(xì)胞增殖反應(yīng)、刺激產(chǎn)生更多的殺傷性CD8⁺

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圖1重組疫苗的鑒定Fig．1Identificationofrecombinantvaccine

圖3不同時期刺激指數(shù)水平Fig．3Levelsofstimulationindexindifferentperiods

ofrecombinantvaccineNote:A.PCRproductsofRV2029;B.Identificationofthedigestedre-combinantplasmind;C.PCRproductsofrBCG-RV2029;D.Theproteinexpr....

圖2重組卡介苗rBCG-R誘導(dǎo)的特異性抗體滴度水平Fig．2LevelofspecificantibodyafterimmunitybyrecombinantrBCG-R

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