本文關(guān)鍵詞：抗體純化工藝中蛋白與配基相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：針對(duì)治療型單克隆抗體純化工藝中的關(guān)鍵問題,本論文利用表面等離子體共振(SPR)技術(shù)研究了疏水電荷誘導(dǎo)層析(HCIC)配基與抗體蛋白質(zhì)的相互作用,對(duì)于表面和溶液的多種因素對(duì)相互作用的影響進(jìn)行了考察。采用自組裝技術(shù)在金襯底上構(gòu)建了兩種不同密度的HCIC配基表面模型。分別利用X射線光電子能譜(XPS)、X射線吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)(NEXAFS)、接觸角和表面等離子體共振(SPR)對(duì)表面化學(xué)與結(jié)構(gòu)、離子化和蛋白質(zhì)結(jié)合進(jìn)行了考察。采用SPR技術(shù)系統(tǒng)研究配基密度和溶液因素(如鹽濃度、pH值)對(duì)抗體和白蛋白吸附的影響。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,配基密度對(duì)相互作用的熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)都有影響。值得注意的是,高配基密度能夠提高結(jié)合強(qiáng)度,增大吸附速率,降低解離速率并會(huì)導(dǎo)致特異性降低。在中性條件下,疏水作用和氫鍵作用都對(duì)蛋白質(zhì)吸附有很大的貢獻(xiàn),而在酸性條件下則會(huì)被靜電排斥力超過。此外,本論文通過利用配基對(duì)鐵磁性納米顆粒進(jìn)行修飾構(gòu)建了新穎的抗體蛋白分離體系,該體系易于小量、快速分離抗體,對(duì)抗體具有一定的特異性吸附能力。以上抗體-配體相互作用的研究將有力支撐和推動(dòng)單克隆抗體分離純化工藝的優(yōu)化。
【關(guān)鍵詞】：疏水電荷誘導(dǎo)層析 表面等離子體共振 抗體 配基密度 相互作用
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392;Q51
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 緒論11-22
• 1.1 抗體11-12
• 1.1.1 抗體的結(jié)構(gòu)11
• 1.1.2 單克隆抗體藥物的發(fā)展11-12
• 1.2 抗體的分離純化方法12-15
• 1.2.1 親和層析12-13
• 1.2.2 離子交換層析13-14
• 1.2.3 疏水相互作用層析14
• 1.2.4 羥基磷灰石層析14-15
• 1.3 疏水性電荷誘導(dǎo)層析原理與應(yīng)用15-17
• 1.3.1 原理15
• 1.3.2 應(yīng)用和工藝優(yōu)化15-16
• 1.3.3 疏水性電荷誘導(dǎo)層析的機(jī)理研究16-17
• 1.4 本論文應(yīng)用的研究工具17-21
• 1.4.1 生物傳感器18-20
• 1.4.1.1 表面等離子體共振18-19
• 1.4.1.2 石英晶體微天平19-20
• 1.4.2 X射線光電子能譜20
• 1.4.3 自組裝單分子膜20-21
• 1.5 本論文研究?jī)?nèi)容21-22
• 2 MEP自組裝表面的制備與表征22-34
• 2.1 引言22-23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器23-24
• 2.2.1 材料和試劑23
• 2.2.2 溶液配制方法23
• 2.2.3 主要儀器23-24
• 2.3 試驗(yàn)方法24-26
• 2.3.1 金襯底的制備24
• 2.3.2 兩種MEP表面模型的制備24-26
• 2.3.2.1 DVS-MEP自組裝表面的制備25
• 2.3.2.2 MEP-only自組裝表面的制備25-26
• 2.3.3 接觸角測(cè)量26
• 2.3.4 X射線光電子能譜(XPS)26
• 2.3.5 X射線吸收精細(xì)結(jié)構(gòu)(NAXAFS)26
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論26-33
• 2.4.1 XPS和NEXAFS對(duì)MEP表面的表征26-32
• 2.4.2 接觸角對(duì)MEP表面的表征32-33
• 2.5 小結(jié)33-34
• 3 利用SPR對(duì)HCIC配基-抗體之間的相互作用的研究34-46
• 3.1 引言34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器34-35
• 3.2.1 材料和試劑34
• 3.2.2 溶液配制方法34
• 3.2.3 主要儀器34-35
• 3.3 試驗(yàn)方法35-36
• 3.3.1 SPR光譜學(xué)35
• 3.3.2 吸附熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)分析35-36
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論36-44
• 3.4.1 利用SPR蛋白吸附對(duì)MEP表面進(jìn)行表征36-38
• 3.4.2 配基密度對(duì)相互作用的影響38-42
• 3.4.3 鹽濃度對(duì)相互作用的影響42-43
• 3.4.4 溶液pH對(duì)相互作用的影響43-44
• 3.5 小結(jié)44-46
• 4 基于鐵磁性納米顆粒的抗體純化研究46-54
• 4.1 引言46
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器46-48
• 4.2.1 材料和試劑46-47
• 4.2.2 溶液配制方法47-48
• 4.2.3 主要儀器48
• 4.3 試驗(yàn)方法48-50
• 4.3.1 磁性納米顆粒的修飾48-49
• 4.3.2 外光譜分析49
• 4.3.3 抗體吸附實(shí)驗(yàn)49
• 4.3.4 SDS-PAGE凝膠電泳49-50
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析50-53
• 4.4.1 紅外光譜表征50-51
• 4.4.2 抗體吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果51-53
• 4.5 小結(jié)53-54
• 5 總結(jié)54-55
• 參考文獻(xiàn)55-63
• 附錄A 英文縮略詞釋義63-64
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況64-65
• 致謝65-66

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 程慧,黃朝峰,段子淵;SPR生物傳感器及其應(yīng)用進(jìn)展[J];中國(guó)生物工程雜志;2003年05期

  本文關(guān)鍵詞：抗體純化工藝中蛋白與配基相互作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：395595