目的: HPV6對皮膚粘膜的感染往往造成局部組織增生而形成CA,CA的轉(zhuǎn)歸與患者的細胞免疫功能密切相關。為了探討CA患者的T細胞免疫狀態(tài),本研究擬:①構(gòu)建一種能夠與HPV6E7抗原特異性T細胞結(jié)合的HLA-A2/HPV6E7四聚體;②應用該四聚體來檢測不同病程CA患者的抗原特異性T細胞的頻率。 方法:①通過原核表達、大量提取HLA-A2-BSP、β2m兩種蛋白,通過體外稀釋復性、與人工合成的HPV6E7抗原肽(GLHCYEQLV)折疊形成相應的HLA-A2/HPV6E7單體,經(jīng)過Western-blot和ELISA證實其構(gòu)象正確。在BirA酶的作用下,將生物素結(jié)合到HLA重鏈的BSP位點,實現(xiàn)HLA-A2/HPV6E7單體的特異位點生物素化。通過生物素與親合素4:1的特異性結(jié)合關系,將4個生物素化的HLA-A2/ HPV6E7單體與PE標記的親合素結(jié)合形成HLA四聚體;②以制備的PE標記的HLA-A2/HPV6E7四聚體和FITC-CD8單克隆抗體對HLA-A2陽性、HPV6感染致CA患者的PBL和疣體組織進行雙色熒光染色,經(jīng)流式細胞儀和熒光顯微鏡觀察。③通過T2細胞(HLA-A2陽性...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
英文摘要
第一部分 HLA-A2/HPV6E7 四聚體的構(gòu)建
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 利用 HLA-A2/HPV6E7 四聚體檢測抗原特異性 CTL
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 家族性進行性色素過度沉著癥致病基因定位于 19p13.1-19pter
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第四部分 FPH 家系的 STK11 基因的克隆和序列鑒定
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻
綜述
致謝
附錄1 （英文縮略詞表）
附錄2 （攻讀學位期間發(fā)表論文）



本文編號：3945940