探索以基因治療為主要手段的抗HBV感染治療的研究是研究熱點之一。目前應用于HBV感染基因治療方案主要有DNA疫苗、核酶、反義核酸、干擾肽及干擾蛋白、Dominant negative突變體(DN突變體)、RNAi等，體外或體內模型上均顯示出有效性。但由于病毒變異，上述方法需要不斷重復給藥，載體的安全性、特異性、高效性和可控性等問題，上述療法臨床應用還有相當一段距離。本研究擬構建一個具有生命體特征的HBV缺陷病毒，以其干擾和抑制HBV的體內復制狀況，并通過調節(jié)機體對二種病毒的免疫反應，阻斷HBV在體內的復制以達到抗HBV感染的目的。 所要構建的HBV缺陷病毒的特征是：其包膜和核衣殼與HBV完全相同，基因組結構中缺失HBV基因組的S基因和Pol基因，保留HBV基因組復制和包裝所需的DR1、DR2、C基因和HBV 3’末端序列，并在缺失的部位引入人免疫調節(jié)基因表達盒和增強基因組復制的肝特異性增強子序列。 具體實施過程為：制備高表達HBV S基因和Pol基因的包裝細胞，為乙肝缺陷病毒的制備作準備；構建含乙肝缺陷病毒基因組的重組逆轉錄病毒載體和含乙肝病毒基因組的重組逆轉錄病毒載體...

【文章頁數】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1·10HBvro盯pMsev(neo)的醉譜分析

的EcoRI和Hpal位點中，構成重組逆轉錄病毒載體HBVpo崢MsCVneo。以pMSCVne�？蛰d體為對照，快篩選取2個重組子質粒，分別用EcoRI、HPal、Ec0R1/HPal作酶切鑒定，見圖1一9。選一個酶切鑒定正確的重組子用EcoRI/Hpal、xhol、BglIx、....

圖I一12HBVS基因表達的Western4Blot分析

1圖I一12HBVS基因表達的Western4Blot分析1:未轉染細胞對照2:HBVS/pLHCX和HavPox/pMsevneo共轉染后G418與3:HBVS/pLHCX轉染后G418篩選的抗性細胞4:pLHCX空載體轉染細胞VPol全長27O0bp，占HBv基因組的84%。....

圖2一4HBvzpMsCvneo的酶切篩m:DL2000DNAMarker;

I和Hpal位點中，構成重組逆轉錄病毒載體HBV/PMSCVneo。以pMSCVneo空載體為對照，快篩選取2個重組子質粒，分別用EcoRFHpal作酶切鑒定，見圖2一4。圖2一4HBvzpMsCvneo的酶切篩選m:DL2000DNAMarker;1:digestedwithE....

圖2一移碼突變處的序列分析

司進行測序，測序結果用DNAsTAR軟件分析。測序結果分析在455bP處出現移碼突變(tttttt~橄tttt)，與正確序列相比多了一個t，移碼突變處的序列分析見圖2一5。圖2一移碼突變處的序列分析

本文編號：3934812