發(fā)布時間：2024-03-04 02:26

　　目的分析Cu²⁺脅迫前后福壽螺谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(PcGST)基因的表達(dá)規(guī)律,探討福壽螺適應(yīng)Cu²⁺的相關(guān)機(jī)制。方法 80只福壽螺隨機(jī)分為4組,每組20只福壽螺, Cu²⁺脅迫濃度分別為0、 50、 100、 150μg/L。分別于Cu²⁺脅迫后的0、 1、 7、 14 d,各組隨機(jī)取3只福壽螺,分離其肝臟、鰓、腎臟組織,分別提取組織中的RNA,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,實(shí)時熒光定量PCR檢測Cu²⁺脅迫前后PcGST m RNA的相對表達(dá)量�；贑u²⁺脅迫下的福壽螺基因轉(zhuǎn)錄組篩選獲得PcGST基因,構(gòu)建pET-28a-PcGST重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E. coil) BL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達(dá),十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDSPAGE)分析重組蛋白表達(dá)情況。將轉(zhuǎn)化菌株(含PcGST基因的E. coil)和非轉(zhuǎn)化菌株(未轉(zhuǎn)化的E. coil)等量分成6份,隨機(jī)取3份作為Cu²⁺

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 福壽螺基本信息
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 Cu2+脅迫前后Pc GST mRNA的相對表達(dá)量
    1.4 Pc GST基因的克隆
    1.5 pET-28a-Pc GST質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.6 Pc GST基因的原核表達(dá)
    1.7 含Pc GST基因的E.coil對Cu2+的耐受能力
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.9 倫理批準(zhǔn)和患者知情同意
2 結(jié)果
    2.1 Cu2+脅迫下Pc GST mRNA的相對表達(dá)量
    2.2 Pc GST基因的擴(kuò)增結(jié)果
    2.3 Pc GST基因的原核表達(dá)
    2.4 含Pc GST基因的E.coil對Cu2+的耐受能力
3 討論



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