丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙肝的病原體，在初次感染后常常轉(zhuǎn)變成慢性持續(xù)性感染，從而易于導(dǎo)致肝硬化和肝癌，但關(guān)于其致癌機(jī)制迄今還不是很清楚，因此對(duì)HCV的病毒復(fù)制以及各個(gè)蛋白功能的研究非常重要，有利于闡明病毒復(fù)制及其在機(jī)體內(nèi)致病的機(jī)理。Core蛋白是HCV的核心蛋白，具有多種功能，多個(gè)研究小組的研究表明Core蛋白能影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化，可能與HCV的致病性密切相關(guān)。 本論文研究了HCV 1型全長(zhǎng)core基因(1-574bp)在真核細(xì)胞中的表達(dá)及其表達(dá)所引起的宿主細(xì)胞的變化。用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ雙酶切pRSET-C獲得全長(zhǎng)core基因，將其插入到真核表達(dá)載體pCDNA3 CMV啟動(dòng)子下游，構(gòu)建了重組真核表達(dá)質(zhì)粒pCDNA3-Core。用脂質(zhì)體LipoVec^TM將重組質(zhì)粒pCDNA3-Core轉(zhuǎn)染到人宮頸癌細(xì)胞Hela細(xì)胞系和猴腎細(xì)胞Cos-7細(xì)胞系中進(jìn)行表達(dá)，設(shè)pCDNA3空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染為空白對(duì)照，設(shè)pEGFP—N1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染為陽(yáng)性對(duì)照。免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了Core蛋白在Hela細(xì)胞系中的表達(dá)，但沒(méi)有觀察到較為明顯的細(xì)胞變化。免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了Core蛋白在...

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    一、 HCV的分子生物學(xué)特征
    二、 Core蛋白的研究進(jìn)展
第二部分 研究論文
    第一章 HCV core基因在大腸桿菌中的表達(dá)及兔抗制備
        一、 前言
        二、 材料與方法
        三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1 、 截短的core基因在BL21菌株中的表達(dá)
            2 、 ELISA檢測(cè)結(jié)果
        四、 討論
    第二章 HCV core基因在真核細(xì)胞中表達(dá)，引起Cos-7細(xì)胞凋亡
        一、 前言
        二、 材料與方法
        三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            1 、 重組真核表達(dá)載體pCDNA3-Core的構(gòu)建及鑒定
            2 、 免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Core蛋白在Hela細(xì)胞系中的表達(dá)
            3 、 免疫斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Core蛋白在Cos-7細(xì)胞中的表達(dá)
            4 、 Hoechst 33258熒光染色檢測(cè)Cos-7細(xì)胞的凋亡
            5 、 DNA Ladder實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Cos-7細(xì)胞的凋亡
            6 、 GFP蛋白的表達(dá)
        四、 討論
參考文獻(xiàn)
研究生期間發(fā)表和待發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3872259