丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙肝的病原體，在初次感染后常常轉變成慢性持續(xù)性感染，從而易于導致肝硬化和肝癌，但關于其致癌機制迄今還不是很清楚，因此對HCV的病毒復制以及各個蛋白功能的研究非常重要，有利于闡明病毒復制及其在機體內致病的機理。Core蛋白是HCV的核心蛋白，具有多種功能，多個研究小組的研究表明Core蛋白能影響細胞的生長和分化，可能與HCV的致病性密切相關。 本論文研究了HCV 1型全長core基因(1-574bp)在真核細胞中的表達及其表達所引起的宿主細胞的變化。用EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ雙酶切pRSET-C獲得全長core基因，將其插入到真核表達載體pCDNA3 CMV啟動子下游，構建了重組真核表達質粒pCDNA3-Core。用脂質體LipoVec^TM將重組質粒pCDNA3-Core轉染到人宮頸癌細胞Hela細胞系和猴腎細胞Cos-7細胞系中進行表達，設pCDNA3空質粒轉染為空白對照，設pEGFP—N1質粒轉染為陽性對照。免疫熒光實驗檢測了Core蛋白在Hela細胞系中的表達，但沒有觀察到較為明顯的細胞變化。免疫斑點實驗檢測了Core蛋白在...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 文獻綜述
    一、 HCV的分子生物學特征
    二、 Core蛋白的研究進展
第二部分 研究論文
    第一章 HCV core基因在大腸桿菌中的表達及兔抗制備
        一、 前言
        二、 材料與方法
        三、 實驗結果
            1 、 截短的core基因在BL21菌株中的表達
            2 、 ELISA檢測結果
        四、 討論
    第二章 HCV core基因在真核細胞中表達，引起Cos-7細胞凋亡
        一、 前言
        二、 材料與方法
        三、 實驗結果
            1 、 重組真核表達載體pCDNA3-Core的構建及鑒定
            2 、 免疫熒光實驗檢測Core蛋白在Hela細胞系中的表達
            3 、 免疫斑點實驗檢測Core蛋白在Cos-7細胞中的表達
            4 、 Hoechst 33258熒光染色檢測Cos-7細胞的凋亡
            5 、 DNA Ladder實驗檢測Cos-7細胞的凋亡
            6 、 GFP蛋白的表達
        四、 討論
參考文獻
研究生期間發(fā)表和待發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3872259