普氏立克次體(Rickettsia prowazekii,R.p)是專性細胞內(nèi)寄生的革蘭氏陰性菌，流行性斑疹傷寒的病原體。普氏立克次體種特異性的120kDa表面蛋白是發(fā)揮主要免疫作用的表面抗原，是發(fā)展流行性斑疹傷寒的診斷制劑和亞單位疫苗的合適靶蛋白。本研究旨在克隆與表達普氏立克次體的120kDa表面蛋白抗原特異性較好的N端部分和免疫反應(yīng)性較好的C端部分的基因片段，并對表達的重組蛋白的抗原性進行研究。 采用PCR方法，從普氏立克次體基因組中擴增到120kDa表面蛋白抗原N端基因片段和C端基因片段，將兩個基因片段分別與原核表達載體pQE30連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒pQE30／N和pQE30／C。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，并用IPTG誘導轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達目的蛋白。SDS-PAGE鑒定pQE30／N轉(zhuǎn)化菌表達的N端重組蛋白的分子量為26kDa，pQE30／C轉(zhuǎn)化菌表達的C端重組蛋白的分子量為67kDa。 免疫印跡分析證明N端重組蛋白和C端重組蛋白均能與普氏立克次體免疫血清特異反應(yīng)，N端重組蛋白僅與立氏立克次體免疫血清發(fā)生交叉反應(yīng)，C端重組蛋白則與立克次體屬的多種立克次體免疫血清發(fā)生交...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
緒論
第一部分 普氏立克次體120kDa表面蛋白N端基因和C端基因的克隆及原核表達
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第二部分 普氏立克次體120kDa表面蛋白N端和C端重組蛋白的免疫原性研究及比較
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
第三部分 普氏立克次體120kDa表面蛋白N端和C端重組蛋白的抗原特異性的研究
    1 材料和方法
    2 結(jié)果
    3 討論
結(jié)論
參考文獻
附錄
在學期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號：3849457