目的對(duì)狂犬病病毒CTN-1株基質(zhì)蛋白(matrix protein,MP)密碼子進(jìn)行優(yōu)化,原核表達(dá)重組蛋白,并制備多克隆抗體。方法通過(guò)GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白編碼序列并體外合成,將目的序列插入原核表達(dá)載體pET-28b,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28b-M,轉(zhuǎn)入大腸埃希菌BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)M蛋白,經(jīng)親和層析和復(fù)性后,免疫豚鼠制備多克隆抗體,Western blot和間接ELISA檢測(cè)多抗的免疫反應(yīng)性以及效價(jià)。結(jié)果成功構(gòu)建了pET-28b-M重組原核表達(dá)質(zhì)粒,并在大腸埃希菌BL21(DE3)中高效表達(dá),經(jīng)親和層析及透析獲得純化的重組M蛋白,制備的多克隆抗體可與M蛋白發(fā)生特異性結(jié)合,效價(jià)達(dá)1∶21 870。結(jié)論成功優(yōu)化表達(dá)了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制備了高效價(jià)的多克隆抗體,為后續(xù)M蛋白生物學(xué)分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 質(zhì)粒、細(xì)菌及病毒
    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.3 主要試劑
    1.4 重組M蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.5 目的基因的誘導(dǎo)表達(dá)
    1.6 目的蛋白的純化及復(fù)性
    1.7 重組M蛋白含量測(cè)定
    1.8 多克隆抗體的制備
    1.9 抗M蛋白多克隆抗體的Western blot分析
    1.1 0 抗M蛋白多克隆抗體的效價(jià)檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28b-M的鑒定
    2.2表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
    2.3 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.4 多克隆抗體的Western blot分析
    2.5 多克隆抗體的效價(jià)
3 討論



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