本文關(guān)鍵詞：體細(xì)胞與早期胚相互作用的初步探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探索體細(xì)胞BMMSCs/HSC/MEF能否在早期胚的環(huán)境影響下去分化為類似胚胎干細(xì)胞的多能干細(xì)胞,為誘導(dǎo)體細(xì)胞為多能干細(xì)胞提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和新思路。方法1.原代分離和培養(yǎng)攜帶報(bào)告基因EGFP的SCE小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(Mouse Embryonic Fibroblast,MEF)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell,BMMSCs)、造血干細(xì)胞(Hematopoietic Stem Cell,HSC)并鑒定獲得穩(wěn)定傳代的細(xì)胞系;2.MEF、BMMSCs經(jīng)5-氮雜胞苷去甲基化后按ESC培養(yǎng)方案培養(yǎng),備用;3.通過顯微注射將攜帶報(bào)告基因EGFP的MEF、BMMSCs、HSCs直接注射或者去甲基化24h后的MEF和BMMSCs注入到野生型ICR小鼠的8-cell(8~10個)、囊胚(10~15個),轉(zhuǎn)至KSOM培養(yǎng)液滴中體外培養(yǎng)48h后置熒光顯微鏡下觀察,計(jì)數(shù)囊胚率、MEF/BMMSCs/HSC嵌合體囊胚率和MEF/BMMSCs/HSC純合子囊胚率;4.部分顯微注射后的8-細(xì)胞胚在KSOM液滴中體外培養(yǎng)24h,囊胚培養(yǎng)2h后移植至假孕2.5d的野生型ICR雌鼠的子宮內(nèi)。結(jié)果1.獲得了SCE-MEF細(xì)胞系,去甲基化處理后的SCE MEF分化細(xì)胞系;2.獲得了SCE-BMMSCs細(xì)胞系,體外定向成骨和成脂誘導(dǎo)分別進(jìn)行vonkossa和油紅O染色鑒定,分子標(biāo)志物分析CD34陰性、OCT4和NANOG陽性;3.利用Mebiol Gel 3D培養(yǎng)法分離獲得SCE-HSC細(xì)胞系,分子標(biāo)志物CD34、ABCG2、CD133均表達(dá)陽性,體外可誘導(dǎo)為粒系和紅系的分化細(xì)胞;4.分別將SCE MEF/BMMSCs/HSC直接注射或者去甲基化后注射到8-cell胚和囊胚中,均可存活,但未見到增殖和對胚的嵌合,移植小鼠未嵌合。結(jié)論1.小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、造血干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、去甲基化處理的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,分別注射到小鼠8-cell胚和囊胚中均可存活,但未見到增殖和對胚的嵌合,初步表明這些細(xì)胞難于受到早期胚的影響發(fā)生分化狀態(tài)的變化。2.首次發(fā)現(xiàn),去甲基化后的小鼠成纖維細(xì)胞,在胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)條件下可以原代轉(zhuǎn)分化為粘附緊密的上皮樣細(xì)胞克隆,且可傳代。克隆表達(dá)多種胚胎干細(xì)胞的特征分子標(biāo)記(OCT4、NANOG、SSEA-1)。表明去甲基化處理聯(lián)合胚胎干細(xì)胞化培養(yǎng),可促使小鼠成纖維細(xì)胞向胚胎干細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化。這為改良i PSC技術(shù),建立非基因轉(zhuǎn)染方法制備i PSC提供了有益的新思路。3.首次成功建立了一種基于溫敏式水凝膠3D培養(yǎng)分離小鼠造血干細(xì)胞的新技術(shù),可以簡便、快速、高效地分離造血干細(xì)胞。為小鼠造血干細(xì)胞研究和進(jìn)一步研發(fā)用于血液病再生醫(yī)學(xué)的人類造血干細(xì)胞分離技術(shù)奠定了重要基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：早期胚 成體干細(xì)胞 成纖維細(xì)胞 3D培養(yǎng) DNA去甲基化
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R321
【目錄】：

• 中英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 材料和方法15-50
• 1. 材料15-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動物15
• 1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)備15-16
• 1.3 實(shí)驗(yàn)試劑16-17
• 1.4 主要試劑的配制17-25
• 2. 實(shí)驗(yàn)方法25-50
• 2.1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（Mouse Embryonic Fibroblast，MEF）的制備25-32
• 2.2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的制備32-40
• 2.3 造血干細(xì)胞的制備40-44
• 2.4 不育雄鼠的制備44
• 2.5 胚胎供體鼠準(zhǔn)備44
• 2.6 代孕母鼠準(zhǔn)備44-45
• 2.7 供體 8-細(xì)胞胚胎/囊胚的獲得45
• 2.8 注射針及持卵針的制備45-46
• 2.9 顯微注射46-48
• 2.10胚胎體外培養(yǎng)48
• 2.11子宮移植48-49
• 2.12 MEF/BMMSCs源小鼠的篩選49-50
• 結(jié)果50-61
• 1. SCE MEF去甲基化后類ESC培養(yǎng)觀察50-51
• 2. SCE MEF去甲基化后類ESC培養(yǎng)分子標(biāo)志物分析51
• 3. SCE BMMSCs的原代培養(yǎng)觀察51-52
• 4. SCE BMMSCs的成脂、成骨誘導(dǎo)分化結(jié)果觀察52-53
• 5. SCE BMMSCs分子標(biāo)志物分析53-54
• 6 SCE BMMSCs去甲基化后類ESC培養(yǎng)觀察54
• 7. SCE HSCs原代培養(yǎng)觀察54-55
• 8. SCE HSCs表面標(biāo)志物分析55
• 9. SCE HSCs體外誘導(dǎo)細(xì)胞形態(tài)學(xué)和表面標(biāo)志物分析55-56
• 10. SCE MEF/BMMSCs/HSC顯微注射后發(fā)育觀察56-59
• 11. 胚胎發(fā)育情況59
• 12. 胚胎移植及MEF/BMMSCs/HSC源小鼠的篩選59-61
• 討論61-65
• 結(jié)論65-66
• 參考文獻(xiàn)66-70
• 綜述70-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 致謝77-78

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 秦小惠;古再麗努爾·艾麥提;邵偉;楊斌;呂強(qiáng);王立文;余雄;;移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對乳腺炎模型大鼠乳腺組織及血清中酶活性變化的影響[J];動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年07期

2 郝玉瑜;王愛玲;顧健;孫繼敏;張夢達(dá);;經(jīng)5-氮胞苷誘導(dǎo)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究[J];安徽醫(yī)藥;2013年07期

3 周晶;巨瀾;于玲范;;骨髓基質(zhì)干細(xì)胞移植對兔梗死心肌交感神經(jīng)表達(dá)的影響[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

4 武重陽;孫蘭軍;趙英強(qiáng);;干細(xì)胞治療心肌梗死的研究概況[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年12期

5 李巧;李興升;王志剛;冉海濤;鐘世根;凌智瑜;李攀;陳慶偉;;超聲微泡聯(lián)合Ad-EGFP/HIF-1α介導(dǎo)EPCs移植治療大鼠心肌梗死[J];中國介入影像與治療學(xué);2011年04期

6 金鵬;金麗娟;李學(xué)奇;;成體干細(xì)胞移植治療心肌梗死的研究進(jìn)展[J];中華老年心腦血管病雜志;2007年10期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳慧穎;轉(zhuǎn)染HO-1基因的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）移植治療慢性心衰的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2012年

2 楊俊杰;基因修飾在提高脂肪來源干細(xì)胞移植治療心梗療效和指導(dǎo)體內(nèi)示蹤中的應(yīng)用研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

3 黃鋒;miR-1下調(diào)Dll-1-Hes-1/Notch信號調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化[D];中南大學(xué);2012年

4 黃遠(yuǎn)航;TGFβ1抑制miR-141上調(diào)HIPK2促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 郝玉瑜;血管緊張素Ⅱ和5-氮胞苷共誘導(dǎo)后的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：體細(xì)胞與早期胚相互作用的初步探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：384299