目的：構(gòu)建可溶性TNF受體(P55) 和IgGFc融合蛋白的高效原核表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn) 在原核細(xì)胞中的高效表達(dá)。在體外對TNFR：IgGFc融合蛋白的免疫學(xué)活性和拮抗 TNF毒副作用的生物學(xué)活性進(jìn)行初步研究，以期為體內(nèi)研究提供基本條件。方法： 以人心肌cDNA文庫為模板，PCR擴(kuò)增TNF受體(P55) 胞外區(qū)全基因(tumor necrosis factor receptor extra-cellular domains，TNFR-ED)，亞克隆入pGEM-T／IgGFc 中構(gòu)建pGEM-T／TNFR-ED：IgGFc重組子，然后以其為模板，在上游引物中引入原 核細(xì)胞高頻密碼子，再次PCR擴(kuò)增去信號肽TNF受體(P55) 胞外區(qū)和IgGFc 融合蛋白基因(TNFR：IgGFc)，亞克隆入pUC19載體，經(jīng)序列測定正確后克隆入 原核表達(dá)載體pRsetA中。將獲得的原核表達(dá)質(zhì)粒pRsetA／TNFR：IgGFc轉(zhuǎn)入大腸 桿菌BL21(DE3) ，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，對表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行免疫學(xué)，生物學(xué)活性鑒定 和初步純化。結(jié)果：TNFR：IgGFc融合蛋白獲得了高效表達(dá)并以包涵體的形式存 在，SDS-...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
1. 前言
2. 材料和方法
3. 結(jié)果
4. 討論
5. 結(jié)論
6. 論文參考文獻(xiàn)
7. 附錄
8. 致謝
9. 綜述
10. 綜述參考文獻(xiàn)



本文編號：3839770