自從核酶這一具有催化活性的RNA分子被發(fā)現(xiàn)以后,國內(nèi)外研究者自然地將目光轉向另一類生物大分子—DNA,力圖尋找和證實一類具有催化功能的DNA分子。具有10-23基序的DNAzyme是一種高效且廣泛催化RNA切割反應的單鏈DNA分子,它是體外選擇(invitro selection)實驗過程的第10輪次篩選出的第23號克隆,稱之10-23 DNAzyme。它由15個脫氧核糖核苷酸(5’GGCTAGCTACAA CGA3’)構成催化結構域,兩側分別有由7-8個脫氧核糖核苷酸構成的底物識別結構域。通過其兩側的底物識別序列與RNA底物通過Watson-Crick堿基配對而特異結合。其切割位點位于RNA分子上的未配對的嘌呤(R=A或G)和已配對的嘧啶(Y=U或C)之間。通過合理設計DNAzyme底物認別部位的核苷酸序列,可對不同的靶RNA分子進行切割。近來研究又發(fā)現(xiàn),通過對DNAzyme的底物識別序列進行一定的化學修飾如在其識別結構域上引入幾個LNA(locked nucleic acid)單體,可顯著增強其化學結構的穩(wěn)定性和切割效率,稱之為LNAzyme。 由于DNAzyme/LNAzyme...

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【學位級別】：博士

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研究流程圖
第一部分：DNAzyme／LNAzyme切割RNA反應動力學實時分析體系的建立
    一、DNAzyme／LNAzyme對RNA的切割及反應動力學實時分析
    二、影響DNAzyme／LNAzyme切割RNA反應動力學的因素
第二部分：DNAzyme／LNAzyme在細胞內(nèi)阻斷丙型肝炎病毒基因的表達
    一、HCV-UTR／C126-EGFP融合蛋白真核表達質粒的構建與鑒定
    二、穩(wěn)定表達HCV-NTR／C126-EGFP的HepG₂細胞系的篩選與鑒定
    三、DNAzyme／LNAzyme阻斷丙型肝炎病毒基因表達的細胞內(nèi)效應
小結
文獻綜述：DNAzyme及LNAzyme研究進展
參考文獻
附錄
致謝



本文編號：3817944