層粘連蛋白是哺乳動物細(xì)胞基質(zhì)中一種主要糖蛋白，是基質(zhì)的主要功能成分，也是胚胎發(fā)育中出現(xiàn) 最早的細(xì)胞外基質(zhì)的成分。它在控制細(xì)胞的增殖、參與細(xì)胞的遷移，控制細(xì)胞分化，促進(jìn)創(chuàng)傷修復(fù)方面起著傳遞信號的作用。層粘連蛋白與Ⅳ型膠原蛋白結(jié)合形成三維精細(xì)結(jié)構(gòu)，賦予組織以韌性、彈性、保水性及對機(jī)械力的緩沖性，并為細(xì)胞提供生存及從事活動的微環(huán)境。層粘連蛋白是由α，β和γ構(gòu)成的三聚體。α₅在成年組織中廣泛表達(dá)，在胚胎發(fā)育過程中，α₅發(fā)揮著重要作用。 本實(shí)驗(yàn)采用RT-PCR技術(shù)，應(yīng)用高保真DNA聚合酶從小鼠心臟，腎等中擴(kuò)增出LG1-3，LG-2，LG3三個基因片段，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳，在接近1.6KB，0.5KB，0.5Kb處出現(xiàn)特異片段，并將其連入pMD18-T載體中，轉(zhuǎn)入JM109細(xì)胞中，提取質(zhì)粒，采用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切鑒定，獲得了1.6KB，0.5KB，0.5Kb的片段，將鑒定理想的質(zhì)粒進(jìn)行測序，獲得正確結(jié)果。 將克隆載體上LG1-3，LG-2，LG3三個基因片段用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切，回收酶切產(chǎn)物，同時(shí)將原核表達(dá)載體pET...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
前言
實(shí)驗(yàn)一 層粘連蛋白α5 LG1-3、LG2、LG3cDNA的克隆、表達(dá)
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實(shí)驗(yàn)流程
        1.3 方法
    2. 結(jié)果與討論
        2.1 總RNA的提取
        2.2 RT-PCR
        2.3 PCR產(chǎn)物克隆
        2.4 克隆質(zhì)粒鑒定
        2.5 克隆質(zhì)粒的序列分析
        2.6 表達(dá)載體目的片段的酶切
        2.7 工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)
    3. 小結(jié)
實(shí)驗(yàn)二 LG1-3目的蛋白多克隆抗體的制備
    1. 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2. 結(jié)果與討論
        2.1 包涵體的制備
        2.2 多克隆抗體制備
    3. 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
英文摘要
個人簡歷



本文編號：3810425