目的:評(píng)價(jià)卵透明帶DNA避孕疫苗pVAX1-pZP3α殼聚糖納米微粒經(jīng)滴鼻和陰道免疫兩種途徑誘發(fā)的粘膜免疫反應(yīng)、抗生育作用和對(duì)卵巢結(jié)構(gòu)的影響,提高卵透明帶DNA避孕疫苗的避孕率,并進(jìn)一步探討用粘膜免疫避免卵透明帶抗原免疫引起卵巢功能紊亂的可行性。方法:制備pVAX1-pZP3α殼聚糖納米微粒,分別滴鼻和陰道免疫10只BALB/c小鼠,對(duì)照組免疫不含DNA的殼聚糖,第3周和第6周分別加強(qiáng)免疫一次,ELISA法檢測(cè)小鼠血清、陰道沖洗液中抗pZP3 IgA和IgG抗體;首次免疫后第10周與有生育力的雄鼠合籠交配,統(tǒng)計(jì)懷孕雌鼠動(dòng)物數(shù);首次免疫后第13周解剖動(dòng)物取出雙側(cè)卵巢,制作石蠟切片,作卵巢組織病理學(xué)觀察。為檢測(cè)卵透明帶DNA避孕疫苗pZP3α抗原在體內(nèi)的表達(dá),構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1-pZP3α,與殼聚糖制備成納米微粒,經(jīng)鼻粘膜和陰道粘膜免疫小鼠,免疫后第2、4、6、8、10天解剖動(dòng)物,取滴鼻免疫小鼠的氣管、肺部組織和陰道免疫小鼠的陰道組織制作冰凍切片,直接在熒光顯微鏡下觀察。結(jié)果:在滴鼻和陰道免疫小鼠血清和陰道沖洗液中可以檢測(cè)到抗pZP3αIgA抗體,抗pZP3 IgA抗體反應(yīng)強(qiáng)度與...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1.前言
    1.1 卵透明帶避孕疫苗的研究概況
    1.2 用DNA疫苗在生殖道誘發(fā)粘膜免疫的研究概況
    1.3 本研究的目的
2.實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
3.實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 卵透明帶DNA疫苗的制備
        3.1.1 重組質(zhì)粒pVAX1-pZP3α的制備
        3.1.2 pVAX1-pZP3α／殼聚糖納米微粒的制備
    3.2 卵透明帶DNA疫苗的免疫和檢測(cè)
        3.2.1 動(dòng)物免疫和樣品收集
        3.2.2 抗pZP3抗體的測(cè)定
        3.2.3 抗生育實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 小鼠卵巢的結(jié)構(gòu)變化觀察
    3.3 以GFP為報(bào)告基因檢測(cè)殼聚糖／DNA疫苗經(jīng)鼻粘膜和陰道粘膜免疫后的抗原表達(dá)
        3.3.1 融合質(zhì)粒pEGFP-N1-ZP3α的構(gòu)建
        3.3.2 pEGFP-N1-ZP3α在體外的表達(dá)鑒定
        3.3.3 利用報(bào)告基因GFP檢測(cè)ZP3α抗原在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 殼聚糖對(duì)pVAX1-pZP3αDNA的包裹率
    4.2 小鼠生理周期不同時(shí)期陰道免疫的結(jié)果
    4.3 pVAX1-pZP3α殼聚糖納米微粒滴鼻和陰道免疫小鼠的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 小鼠血清抗pZP3 IgA抗體反應(yīng)結(jié)果
        4.3.2 小鼠血清抗pZP3 IgG抗體反應(yīng)結(jié)果
        4.3.3 小鼠陰道沖洗液抗pZP3 IgA抗體反應(yīng)結(jié)果
        4.3.4 抗生育結(jié)果
        4.3.5 小鼠卵巢的組織學(xué)觀察結(jié)果
    4.4 以GFP為報(bào)告基因檢測(cè)殼聚糖／DNA疫苗經(jīng)鼻粘膜和陰道粘膜免疫后的抗原表達(dá)結(jié)果
        4.4.1 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-pZP3α的構(gòu)建和鑒定結(jié)果
        4.4.2 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-pZP3α在HeLa細(xì)胞中表達(dá)的結(jié)果
        4.4.3 利用報(bào)告基因GFP檢測(cè)ZP3α抗原在小鼠體內(nèi)表達(dá)的結(jié)果
        4.4.4 冰凍切片H.E.染色結(jié)果
        4.4.5 冰凍切片間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果
5.討論
    5.1 本研究的意義
    5.2 滴鼻、陰道免疫小鼠后誘發(fā)的抗ZP3抗體反應(yīng)
    5.3 抗生育效果與免疫對(duì)小鼠卵巢的影響
    5.4 重組質(zhì)粒pEGFP-N1-ZP3α的構(gòu)建和體外表達(dá)
    5.5 利用報(bào)告基因GFP檢測(cè)DNA在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
    5.6 結(jié)論
6.參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號(hào)：3809217