目的:分析BR3胞外區(qū)保守結(jié)構(gòu)域附近剛性區(qū)域在BR3結(jié)合BAFF過程中的作用。方法:將BR3胞外區(qū)分成包含Dx L結(jié)構(gòu)域的BR3-1和其C端相鄰的BR3-2,構(gòu)建BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重組質(zhì)粒。將正確的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc重組子轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21中,誘導(dǎo)表達(dá),并用蛋白A凝膠親和層析柱純化獲得相應(yīng)蛋白。ELISA檢測其結(jié)合BAFF,BR3-1/2小肽對BR3-1-Fc與BAFF結(jié)合活性的影響。結(jié)果:表達(dá)純化出純度高達(dá)90%的BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白。融合蛋白可與BAFF結(jié)合,且具有劑量依賴性。BR3-2小肽在高濃度條件下對BR3-1-Fc與BAFF的結(jié)合起促進(jìn)作用,300μg/ml時(shí),促進(jìn)作用達(dá)20%。結(jié)論:BR3受體胞外區(qū)保守Dx L結(jié)構(gòu)域相鄰的BR3-2剛性結(jié)構(gòu)區(qū)域也可與BAFF結(jié)合,在BR3與BAFF的高親和性能中起作用,為進(jìn)一步設(shè)計(jì)高親和性能BAFF拮抗肽奠定了理論基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 方法
        1.2.1 BR3-1和BR3-2的設(shè)計(jì)
        1.2.2 p ET30a-BR3-1-Fc和p ET30a-BR3-2-Fc融合質(zhì)粒構(gòu)建
        1.2.3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)和純化
        1.2.4 ELISA融合蛋白結(jié)合的活性分析和小肽競爭
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白的表達(dá)純化
    2.3 BR3-1-Fc和BR3-2-Fc融合蛋白結(jié)合BAFF的生物學(xué)活性
    2.4 肽抑制/增加BR3-1-Fc和BAFF的相互作用
3 討論



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