【背景】EB病毒是一個(gè)常見(jiàn)的病原,它能引起霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤以及胃癌、鼻咽癌。該病毒編碼的膜蛋白BNLF2a抑制抗原轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TAP (Transporter associated with antigen processing)從而逃逸T細(xì)胞的清除。TAP屬于ABC(ATP-bindingcassette)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族,是由TAP1和TAP2兩個(gè)亞基構(gòu)成的。TAP通過(guò)ATP提供能量,跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)抗原多肽,這一過(guò)程伴隨著構(gòu)象變化�！灸康摹恐荚诮沂綛NLF2a是否影響TAP的構(gòu)象變化�！痉椒ā縏AP蛋白核酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域的二聚體界面的D-loop進(jìn)行點(diǎn)突變,引入半胱氨酸。在表達(dá)和不表達(dá)BNLF2a情況下,采用氧化性的二價(jià)銅離子交聯(lián)半胱氨酸,并通過(guò)Westernblot對(duì)比TAP的半胱氨酸形成二硫鍵的比例。【結(jié)果】BNLF2a表達(dá)使TAP被交聯(lián)的比例增高�！窘Y(jié)論】BNLF2a可能將TAP穩(wěn)定在核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域二聚化的構(gòu)象,從而同時(shí)抑制ATP和抗原多肽結(jié)合到TAP上來(lái)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2 方法
        1.2.1 突變株的構(gòu)建與表達(dá)
        1.2.2 sf9昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染及桿狀病毒擴(kuò)增與表達(dá)
        1.2.3 膜蛋白的提取
        1.2.4 肽結(jié)合檢測(cè)
        1.2.5 肽轉(zhuǎn)運(yùn)檢測(cè)
        1.2.6 半胱氨酸交聯(lián)
        1.2.7 免疫共沉淀
2 結(jié)果與分析
    2.1 TAP蛋白同源的ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)構(gòu)分析
    2.2 TAP突變株的表達(dá)
    2.3 BNLF2a抑制TAP突變株的多肽結(jié)合活性和轉(zhuǎn)運(yùn)活性
    2.4 TAP突變株ATP結(jié)合結(jié)構(gòu)域的二聚化
    2.5 BNLF2a促進(jìn)TAP突變株二硫鍵交聯(lián)
    2.6 BNLF2a 1-39抑制TAP突變株的活性
3 討論與結(jié)論



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