分泌性表達(dá)外源基因是近年來在構(gòu)建活載體疫苗中常常采用的策略。分泌表達(dá)能減輕細(xì)菌載體的代謝負(fù)擔(dān)，提高疫苗的免疫效果。引起人泌尿道感染的大腸桿菌(Uropathogenic Escherichia coli，UPEC)的α-溶血素分泌系統(tǒng)是目前研究最透徹的革蘭氏陰性菌Ⅰ型分泌系統(tǒng)。該系統(tǒng)組成簡單，由HlyB、HlyD、TolC三個轉(zhuǎn)運蛋白組成：適用范圍廣，只要宿主菌的外膜上具有TolC樣蛋白，理論上都可以使用此分泌系統(tǒng)構(gòu)建分泌型活載體疫苗。所以α-溶血素分泌系統(tǒng)是目前應(yīng)用最廣泛的細(xì)菌內(nèi)源性分泌系統(tǒng)。 本研究首先從UPEC菌株J96染色體上克隆了包括上游調(diào)控序列在內(nèi)的α-溶血素分泌系統(tǒng)決定簇序列，利用基因測序和血瓊脂平板溶血環(huán)生成實驗對克隆產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明成功獲得了序列正確、功能正常的α-溶血素分泌系統(tǒng)基因簇片段。參考以前構(gòu)建分泌型表達(dá)質(zhì)粒的經(jīng)驗，分別將需要表達(dá)的外源基因(ureB-HspA、hIL-6、hspA、trxA)克隆后，將外源基因片段和包含hlyAs、hlyB、hlyD基因序列的hlyAsBD片段與表達(dá)載體pQE30連接，構(gòu)建了系列分泌表達(dá)質(zhì)粒載體及其非分泌的對照...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略詞表
前言
第一部分 UPEC菌株J96染色體α-溶血素分泌系統(tǒng)相關(guān)基因的克隆與鑒定
    實驗材料
    實驗方法
    實驗結(jié)果
    實驗結(jié)果討論
第二部分 分泌型表達(dá)載體的構(gòu)建及其分泌表達(dá)效果的初步驗證
    實驗材料
    實驗方法
    實驗結(jié)果
    實驗結(jié)果討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
附: 綜述



本文編號：3762372