目的 構(gòu)建突變?nèi)薈D59的真核表達(dá)系統(tǒng)，獲得高效表達(dá)突變?nèi)薈D59的CHO細(xì)胞株，并進(jìn)行糖化和非糖化突變?nèi)薈D59蛋白功能的檢測(cè)，探討CD59作為補(bǔ)體攻膜復(fù)合體抑制物在糖尿病血管并發(fā)癥病理機(jī)制中的重要作用，為人類糖尿病血管增殖癥的發(fā)病機(jī)理提供依據(jù)。 方法 突變?nèi)薈D59的真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的建立：將含有突變?nèi)薈D59的重組PALTER-MAX質(zhì)粒與PcDNA運(yùn)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞；用新霉素類似物(G418)篩選出陽性克隆，并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步篩選出高效表達(dá)克隆，建立穩(wěn)定高效表達(dá)CHO細(xì)胞株。應(yīng)用免疫組化方法、免疫熒光技術(shù)進(jìn)一步鑒定穩(wěn)定高效表達(dá)CHO細(xì)胞株；裂解細(xì)胞，應(yīng)用SDS—PAGE凝膠電泳技術(shù)、免疫印跡技術(shù)、固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)驗(yàn)證穩(wěn)定高效表達(dá)陽性細(xì)胞CD59的表達(dá)；高糖培養(yǎng)穩(wěn)定高效表達(dá)陽性細(xì)胞，并運(yùn)用BCECF染料釋放試驗(yàn)研究糖化和非糖化突變?nèi)薈D59的抗補(bǔ)體活性。 結(jié)果 成功構(gòu)建突變?nèi)薈D59的真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)：運(yùn)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法將含有突變?nèi)薈D59的PALTER—MAX重組質(zhì)粒與PCDNA共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞：用含有400ug／mlG4...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
引言
材料
方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3759973