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突變?nèi)薈D59基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)活性研究

發(fā)布時(shí)間:2023-03-11 17:52
  目的 構(gòu)建突變?nèi)薈D59的真核表達(dá)系統(tǒng),獲得高效表達(dá)突變?nèi)薈D59的CHO細(xì)胞株,并進(jìn)行糖化和非糖化突變?nèi)薈D59蛋白功能的檢測(cè),探討CD59作為補(bǔ)體攻膜復(fù)合體抑制物在糖尿病血管并發(fā)癥病理機(jī)制中的重要作用,為人類糖尿病血管增殖癥的發(fā)病機(jī)理提供依據(jù)。 方法 突變?nèi)薈D59的真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的建立:將含有突變?nèi)薈D59的重組PALTER-MAX質(zhì)粒與PcDNA運(yùn)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞;用新霉素類似物(G418)篩選出陽性克隆,并用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步篩選出高效表達(dá)克隆,建立穩(wěn)定高效表達(dá)CHO細(xì)胞株。應(yīng)用免疫組化方法、免疫熒光技術(shù)進(jìn)一步鑒定穩(wěn)定高效表達(dá)CHO細(xì)胞株;裂解細(xì)胞,應(yīng)用SDS—PAGE凝膠電泳技術(shù)、免疫印跡技術(shù)、固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)驗(yàn)證穩(wěn)定高效表達(dá)陽性細(xì)胞CD59的表達(dá);高糖培養(yǎng)穩(wěn)定高效表達(dá)陽性細(xì)胞,并運(yùn)用BCECF染料釋放試驗(yàn)研究糖化和非糖化突變?nèi)薈D59的抗補(bǔ)體活性。 結(jié)果 成功構(gòu)建突變?nèi)薈D59的真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng):運(yùn)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)法將含有突變?nèi)薈D59的PALTER—MAX重組質(zhì)粒與PCDNA共轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞:用含有400ug/mlG4...

【文章頁數(shù)】:74 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

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致謝
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