目的研究細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶5(ERK5)和c-Jun N端激酶(JNK)在骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(BMP9)誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化中的作用。方法利用重組腺病毒將BMP9基因?qū)隒3H10T1/2細(xì)胞,Western blot法檢測加入BMP9及不同濃度ERK5特異性抑制劑BIX02189或JNK特異性抑制劑SP600125后ERK5和JNK的激活情況;實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)檢測BMP9誘導(dǎo)1周后心肌特異性基因肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2C(MEF2C)、GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)表達(dá);Western blot法檢測經(jīng)BMP9誘導(dǎo)3周后心肌特異性蛋白縫隙連接蛋白43(CX43)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)表達(dá)和免疫熒光技術(shù)檢測CX43、cTnT在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。結(jié)果在轉(zhuǎn)染效率達(dá)50%左右的情況下,BMP9可過度激活ERK5和JNK,使其磷酸化水平顯著增高(P<0.05);BIX02189抑制ERK5激活后,BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞的心肌分化標(biāo)志物MEF2C、GATA4、CX43、cTnT均受到顯著抑制(P<0.05),JNK特異性抑制劑SP600...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1材料
    1.2方法
        1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 Western blot法檢測p-ERK5、t-ERK5、p-JNK、t-JNK表達(dá)
        1.2.3 qRT-PCR檢測心肌特異性基因GATA4、MEF2C表達(dá)
        1.2.4 Western blot法檢測心肌特異性蛋白c Tn T和CX43表達(dá)
        1.2.5免疫熒光技術(shù)定位c Tn T、CX43在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)
        1.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 C3H10T1/2細(xì)胞轉(zhuǎn)染及生長情況
    2.2 Western blot法檢測BMP9對ERK5和JNK激酶的激活情況及抑制劑處理后的變化
    2.3 qRT-PCR檢測心肌特異性基因MEF2C、GATA4表達(dá)
    2.4 Western blot法檢測心肌特異性蛋白c Tn T和CX43表達(dá)
    2.5 免疫熒光觀察c Tn T、CX43的定位
3 討論



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