胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)是一種多功能細(xì)胞調(diào)控因子，大量 實(shí)驗(yàn)表明，IGF-1生物學(xué)作用廣泛，對(duì)多種組織器官有生物學(xué)作用。目 前，人IGF-1(hIGF-1)制劑在臨床上已用于治療糖尿病、胰島素抵抗 綜合癥、侏儒癥及神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種頑疾，取得較好的臨床效果，顯 示出良好的應(yīng)用前景。 為獲得大量純度高的、具有生物學(xué)活性的hIGF-1以滿足基礎(chǔ)研究 與臨床應(yīng)用的需要，本文應(yīng)用基因工程方法，將hIGF-1基因與原核表 達(dá)載體pRSET B進(jìn)行重組，在大腸桿菌中進(jìn)行了表達(dá)，并對(duì)其分離純 化及性質(zhì)檢定方法進(jìn)行了探討。 首先，根據(jù)已知天然hIGF-1編碼基因序列，在不改變氨基酸序列 的條件下，人工設(shè)計(jì)合成了適合于在大腸桿菌中表達(dá)的hIGF-1基因并 克隆于pUC19中，構(gòu)建了pUCIGF克隆載體。設(shè)計(jì)引物，導(dǎo)入合適的 酶切位點(diǎn)，以pUCIGF為模板，PCR擴(kuò)增目的基因，經(jīng)適當(dāng)酶切后，克 隆于原核表達(dá)載體pRSET B中，構(gòu)建了pRSET-IGF表達(dá)重組質(zhì)粒，經(jīng) PCR篩選、酶切鑒定和核苷酸序列測(cè)定，確定重組質(zhì)粒pRSET-IGF構(gòu) 建完全正確。將重組質(zhì)粒pRSET-IGF轉(zhuǎn)...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
中英文縮略語(yǔ)
前言
試劑與材料、主要儀器
實(shí)驗(yàn)方法
    一、 hIGF-1基因的設(shè)計(jì)與合成
    二、 引物的設(shè)計(jì)與合成
    三、 表達(dá)載體的選擇
    四、 PCR擴(kuò)增目的基因
    五、 hIGF-1基因的克隆
    六、 重組質(zhì)粒的篩選與鑒定
    七、 目的基因的表達(dá)
    八、 表達(dá)產(chǎn)物的純化
    九、 hIGF-1的性質(zhì)檢定
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    一、 hIGF-1基因的設(shè)計(jì)與合成
    二、 hIGF-1基因的擴(kuò)增
    三、 重組質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定
    四、 重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達(dá)
    五、 hIGF-1蛋白的純化
    六、 表達(dá)產(chǎn)物的性質(zhì)檢定
討論
    一、 hIGF-1基因克隆的策略
    二、 目的基因的表達(dá)
    三、 重組蛋白的純化
    四、 重組蛋白的生物學(xué)活性鑒定
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝



本文編號(hào)：3755325