發(fā)布時(shí)間：2017-05-17 16:35

  本文關(guān)鍵詞：Rab7通過(guò)其C末端依賴方式負(fù)向調(diào)控TLR-3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：模式識(shí)別受體TLR受體家族中的TLR-3受體識(shí)別dsRN A,啟動(dòng)固有免疫應(yīng)答。但異�；蜻^(guò)度活化的TLR-3會(huì)導(dǎo)致生理功能紊亂和疾病的發(fā)生。Rab7是一類定位于晚期內(nèi)體／溶酶體結(jié)構(gòu)的小G蛋白,近年來(lái)的研究表明,Rab7參與了多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。關(guān)于Rab7對(duì)位于內(nèi)體結(jié)構(gòu)的TLR-3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控研究甚少。本論文的目的是探討Rab7對(duì)TLR-3激活后的天然免疫應(yīng)答的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控。方法：采用siRNA干擾RAW264.7細(xì)胞中Rab7基因,通過(guò)Real-time PCR檢測(cè)Rab7基因沉默后TLR-3表達(dá)水平的變化。檢測(cè)Rab7基因沉默后對(duì)PolyI：C誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IFN-α、 IFN-β與IP-10的表達(dá)的影響。通過(guò)Western blot檢測(cè)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路ERK、JNK口p38的磷酸化水平。將Rab7的真核表達(dá)質(zhì)粒和C末端缺失質(zhì)粒Rab7△C轉(zhuǎn)染RAW26.7田胞,建立穩(wěn)定表達(dá)Rab7及其突變體的細(xì)胞系。以該細(xì)胞系為模型,PolyI:C刺激不同時(shí)間后檢測(cè)TNF-α、IL-1β、 IFN-α、IFN-β與IP-10的表達(dá)。通過(guò)Western b lot檢測(cè)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化。結(jié)果：Rab7基因沉默后顯著促進(jìn)了TLR-3 mRNA的表達(dá)；促進(jìn)了PolyI：C誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IFN-α、IFN-β和IP-10 mRNA的表達(dá)(p0.05)。Rab7基因沉默后促進(jìn)了PolyI:C誘導(dǎo)的ERK和p38的磷酸化。Rab7過(guò)表達(dá)后顯著抑制了PolyI:C誘導(dǎo)的TNF-α、IL-1β、IFN-α、IFN-β和IP-10 mRNA的表達(dá),轉(zhuǎn)染Rab7的突變體Rab7AC后顯著了PolyI：C誘導(dǎo)的細(xì)胞因子的表達(dá)。Western Blot結(jié)果顯示,Rab7基因的C末端缺失后顯著促進(jìn)了PolyI：C誘導(dǎo)的ERK、JNK、p38的磷酸化。結(jié)論：Rab7通過(guò)其C末端依賴的方式負(fù)向調(diào)控了TLR-3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：Rab7 TLR3 天然免疫 炎性因子 MAPK
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 1 引言8-14
• 1.1 固有免疫系統(tǒng)和Toll樣受體8-10
• 1.1.1 固有免疫系統(tǒng)8
• 1.1.2 Toll樣受體8
• 1.1.3 Toll樣受體與病毒感染8-9
• 1.1.4 TLR-3激活后的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)9-10
• 1.2 Rab7蛋白簡(jiǎn)介10-12
• 1.2.1 Rab蛋白家族10-11
• 1.2.2 Rab711-12
• 1.3 巨噬細(xì)胞在抗病毒中作用12-13
• 1.4 Rab7與TLR-3激活后的信號(hào)通路之間關(guān)系的研究意義13-14
• 2 Rab7對(duì)PolyI：C刺激的TLR-3下游信號(hào)因子及小鼠巨噬細(xì)胞中MAPKs信號(hào)通路的影響14-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料14-16
• 2.1.1 細(xì)胞株及主要試劑14-15
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器15
• 2.1.3 試劑配制15
• 2.1.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠與分離膠配制15-16
• 2.1.5 引物序列16
• 2.2 試驗(yàn)方法16-21
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)16-17
• 2.2.2 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株建立17
• 2.2.3 SiRNA轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞及處理17-18
• 2.2.4 PolyI：C刺激細(xì)胞18
• 2.2.5 細(xì)胞總RNA提取18
• 2.2.6 cDNA的制備18-19
• 2.2.7 Real-time PCR檢測(cè)19-20
• 2.2.8 數(shù)據(jù)處理20
• 2.2.9 細(xì)胞蛋白提取及BCA法測(cè)定蛋白含量20
• 2.2.10 SDS-PAGE電泳20
• 2.2.11 蛋白雜交檢測(cè)20-21
• 2.3 結(jié)果分析21-32
• 2.3.1 Rab7干擾后對(duì)PolyI：C激活的TLR-3下游細(xì)胞因子及MAPKs信號(hào)通路的影響21-28
• 2.3.2 Rab7 C末端缺失對(duì)PolyI：C激活的TLR-3下游細(xì)胞因子的變化及小鼠巨噬細(xì)胞中MAPKs信號(hào)通路的影響28-32
• 3 討論32-33
• 4 結(jié)論33-34
• 5 展望34-35
• 致謝35-36
• 參考文獻(xiàn)36-39
• 作者簡(jiǎn)介39

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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  本文關(guān)鍵詞：Rab7通過(guò)其C末端依賴方式負(fù)向調(diào)控TLR-3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：373900