目的:通過納米抗體CDR3區(qū)展示生存素N端表位的方式,探索納米抗體在抗原表位展示中的作用。方法:通過基因合成方法將生存素N端起始表位（氨基酸序列1～15）插入納米抗體CDR3區(qū),再構(gòu)建到原核表達載體pET24a中,IPTG誘導(dǎo)表達,用帶His標(biāo)簽的填料純化,獲得高純度的目的蛋白,免疫雌性BALB/c小鼠,間接ELISA檢測5次免疫后的效價,用抗原偶聯(lián)純化介質(zhì)純化免疫多抗,Western印跡檢測多抗特異性。結(jié)果:IPTG誘導(dǎo)后,目的蛋白主要以包涵體形式存在,親和層析獲得純度大于96%的目的蛋白,包涵體經(jīng)復(fù)性后免疫小鼠,效價可達1∶512 000,Western印跡特異性檢測顯示免疫多抗能夠特異性結(jié)合生存素。結(jié)論:納米抗體CDR3區(qū)生存素抗原N端表位展示的方法可用于抗生存素抗體的制備,并為今后納米抗體表位展示相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 生存素表位選擇與Nb-SurvivinE基因合成
    1.3 Nb-survivinE原核表達載體構(gòu)建、表達、純化
    1.4 Nb-SurvivinE免疫及血清效價檢測
    1.5 Nb-survivinE多抗純化及效價檢測
    1.6 Western印跡檢測Nb-survivinE多抗特異性
2 結(jié)果
    2.1 Nb-SurvivinE載體構(gòu)建及鑒定
    2.2 Nb-SurvivinE表達及純化
    2.3 Nb-survivinE血清效價檢測
    2.4 Nb-SurvivinE免疫血清純化及檢測
    2.5 Western印跡鑒定Nb-SurvivinE多抗特異性
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]G250納米抗體靶向的載藥納米微泡抑制腎癌細(xì)胞生長的實驗研究[J]. 余志平,胡明,王洛夫,郭燕麗,江軍,蘭衛(wèi)華,徐丹,朱連華.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2018(24)



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