目的制備抗犬新孢子蟲MIC6單克隆抗體,并進(jìn)行鑒定。方法用重組蛋白p GEX-MIC6作為抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾細(xì)胞,與小鼠骨髓瘤細(xì)胞SP2/0融合,對融合后的雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行篩選后,經(jīng)腹腔注射BALB/c小鼠,制備腹水,鑒定單抗的亞類。采用辛酸-硫酸銨法結(jié)合蛋白親和層析柱純化腹水,SDS-PAGE分析抗體的相對分子質(zhì)量,間接ELISA法檢測抗體效價及特異性,BCA蛋白濃度檢測試劑盒測定抗體濃度。結(jié)果最終獲得兩株能穩(wěn)定分泌新孢子蟲MIC6蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1A1和1H11,分泌的抗體分別屬于Ig G1和Ig G2b亞類。純化后的腹水經(jīng)SDS-PAGE分析,分別可見相對分子質(zhì)量約為50 000的重鏈和25 000的輕鏈條帶,純化效果較好;1A1和1H11的腹水效價分別為5.12×104和1.024×105,濃度分別為0.935和2.010 mg/ml,兩株單抗均能特異性識別新孢子蟲,與弓形蟲無交叉反應(yīng)。結(jié)論制備的抗犬新孢子蟲MIC6單克隆抗體特異性較強,為進(jìn)一步研究新孢子蟲MIC6的生物學(xué)功能及建立特異敏感的新孢子蟲檢測方法奠定了基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 蟲株、細(xì)胞及重組蛋白
    1.2 實驗動物
    1.3 主要試劑
    1.4 動物免疫及血清抗體效價的檢測
    1.5 雜交瘤細(xì)胞的制備
        1.5.1 飼養(yǎng)層細(xì)胞的準(zhǔn)備
        1.5.2 細(xì)胞融合
    1.6 雜交瘤細(xì)胞的篩選及亞克隆
    1.7 腹水的制備
    1.8 單抗亞類的鑒定
    1.9 單抗的純化
        1.9.1 辛酸-飽和硫酸銨法
        1.9.2 親和層析法
        1.9.3 純化后腹水的SDS-PAGE分析
    1.1 0 純化單抗的鑒定
        1.1 0. 1 效價的測定
        1.1 0. 2 濃度的測定
        1.1 0. 3 特異性的檢測
2 結(jié)果
    2.1 雜交瘤細(xì)胞株的篩選
    2.2 單抗的亞類
    2.3 純化后腹水的SDS-PAGE分析
    2.4 純化單抗的鑒定
        2.4.1 效價
        2.4.2 濃度
        2.4.3 特異性
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3697598