目的探討抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路對(duì)兔原代巨噬細(xì)胞自體吞噬中的影響。方法分離培養(yǎng)純種新西蘭兔腹腔原代巨噬細(xì)胞并分為4組,加入磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制劑LY294002（10μmol/L）組、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抑制劑雷帕霉素（10 nmol/L）組、蛋白激酶B（Akt）抑制劑曲西立濱組（20μmol/L）以及空白對(duì)照組。共培養(yǎng)4 h、12 h后分別收集細(xì)胞,運(yùn)用透射電鏡觀察巨噬細(xì)胞自噬體的變化,細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)微管相關(guān)蛋白輕鏈3Ⅱ（LC3Ⅱ）分子的表達(dá),Western blot檢測(cè)Akt、mTOR、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化mTOR（pmTOR）及自噬相關(guān)蛋白Beclin-1和自噬蛋白Atg5-Atg12連接體的表達(dá),單丹酰尸胺（MDC）染色法觀察自噬溶酶體的變化。結(jié)果與空白對(duì)照組相比,透射電鏡下LY294002組自噬體、自噬空泡、髓磷脂圖像等自噬標(biāo)記物明顯減少,雷帕霉素組、曲西立濱組明顯增多;激光共聚焦顯微鏡下LY294002組LC3Ⅱ表達(dá)顯著減少,雷帕霉素組、曲西立濱組表達(dá)顯著增多;Western blot結(jié)果顯示LY294002組Bec... 

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1. 2 試劑和藥品
    1. 3 儀器
    1. 4 家兔原代巨噬細(xì)胞培養(yǎng)及分組
    1. 5 透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)
    1. 6 細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記
    1. 7 單丹磺酰尸胺( MDC) 染色
    1. 8 Western blot檢測(cè)細(xì)胞中m TOR、p-m TOR、Akt、p-Akt、Beclin-1 及Atg5-Atg12 蛋白的表達(dá)
    1. 9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2. 1 透射電鏡觀察細(xì)胞自噬體
    2. 2 細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記情況
    2. 3 自噬溶酶體的表達(dá)
    2. 4 蛋白表達(dá)情況
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]自體吞噬在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的作用[J]. 翟純剛,季曉平,陳文強(qiáng).  國(guó)際心血管病雜志. 2013(03)
[2]PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在巨噬細(xì)胞自噬及動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定中的作用[J]. 王和峰,翟純剛,龐文會(huì),王晨,楊敏,趙凱,李大慶,張運(yùn),李繼福,陳文強(qiáng).  中國(guó)病理生理雜志. 2013(03)
[3]口服雷帕霉素抑制支架內(nèi)再狹窄的血管內(nèi)超聲的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 邵娜,陳文強(qiáng),李大慶,由倍安,安貴鵬,齊天軍,徐福彪,胡曉波,杜金玲,楊敏,王晨,張運(yùn),陳玉國(guó),李繼福.  山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2011(06)



本文編號(hào)：3697455