脫離紅細胞后的血紅蛋白四聚體結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、氧親和力強、半衰期短，還會引起一定的腎毒性。化學修飾作為一種新興技術(shù)，能有效地改善上述不良特性。無基質(zhì)豬血紅蛋白（SFH）由新鮮豬血溶血制得并經(jīng)超速離心。0.45μm到0.22μm微孔濾膜過濾等步驟純化，純化產(chǎn)物與雙（3，5-二溴水楊基）延胡索酸酯（簡稱DBBF）以1：2的摩爾比在脫氧、pH7.2、37℃環(huán)境中反應(yīng)2小時，所得產(chǎn)物（DBBF-pHb）的氧親和方大大下降，與天然蛋白質(zhì)相比，DBBF-pHb具有明顯的抗α₂β₂四聚體解聚的特性。經(jīng)NHS活化酶活性mPEG以30：1的摩爾比與DBBF-pHb在脫氧室溫條件下進一步反應(yīng)，對所得產(chǎn)物的半飽和氧分壓(P₅₀)、希爾系數(shù)（Hill）等有關(guān)血紅蛋白攜氧能力參數(shù)以及修飾程度和分子量的測定表明，這樣的偶聯(lián)修飾獲得了攜氧能力好、分子量適宜、四聚體穩(wěn)定的產(chǎn)物mPEG-DBBF-pHb。 研究了SFH、DBBF-pHb以及mPEG-DBBF-pHb對動物免疫系統(tǒng)的影響。SFH引起的抗體滴度為1：400，DBBF修飾... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
第一部分 文獻綜述（血紅蛋白類血液替代品的研制及應(yīng)用）
    1. 前言
    2. 血紅蛋白類血液代用品
        2.1 無基質(zhì)血紅蛋白
        2.2 化學修飾血紅蛋白
        2.3 微囊化血紅蛋白
    3. 化學修飾Hb的攜氧能力的評價
        3.1 氧親和力
        3.2 Hill系數(shù)
        3.3 氧傳遞及其消耗速率
        3.4 血漿中二氧化碳分壓
        3.5 半衰期
        3.6 血漿中metHb的含量
    4. 血紅蛋白類血液替代品的實用性和安全性研究
        4.1 器官灌注和器官保存的研究
        4.2 血板聚集效應(yīng)
        4.3 對補體系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的影響
        4.4 腎中毒和酸中毒現(xiàn)象
        4.5 缺血再灌注中血液動力學參數(shù)的變化
第二部分 論文部分
    第一章 聚乙二醇的活化
        1.1 引言
        1.2 材料和方法
            1.2.1 材料
            1.2.2 方法
                1.2.2.1 mPEG的活化
                1.2.2.2 mPEG活化程度的測定
                1.2.2.3 mPEG修飾蛋白質(zhì)能力的測定
        1.3 結(jié)果與討論
            1.3.1 mPEG活化程度的測定
            1.3.2 mPEG修飾蛋白質(zhì)程度的測定
    第二章 無基質(zhì)豬血紅蛋白的制備、化學修飾及其性質(zhì)
        2.1 引言
        2.2 材料和方法
            2.2.1 材料
            2.2.2 方法
                2.2.2.1 無基質(zhì)豬血紅蛋白的制備
                2.2.2.2 DBBF交聯(lián)脫氧血紅蛋白
                2.2.2.3 活性mPEG-SS修飾DBBF交聯(lián)的豬血紅蛋白
                2.2.2.4 氧解離曲線、半飽和氧分壓（P_（50））、Hill系數(shù)的測定
                2.2.2.5 豬血紅蛋白濃度的測定
                2.2.2.6 高鐵血紅蛋白含量的測定
                2.2.2.7 pH梯度等電聚焦電泳
                2.2.2.8 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（不連續(xù)垂直電泳）
        2.3 結(jié)果與討論
            2.3.1 豬血紅蛋白及其化學修飾產(chǎn)物的理化性質(zhì)和氧結(jié)合特性
            2.3.2 豬血紅蛋白及其化學修飾產(chǎn)物的電泳
        2.4 小結(jié)
    第三章 偶聯(lián)復(fù)合物的免疫原性的研究
        3.1 材料
            3.1.1 主要試劑
            3.1.2 主要儀器
        3.2 方法
            3.2.1 抗血清的制備
            3.2.2 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）
        3.3 結(jié)果與討論
    第四章 偶聯(lián)復(fù)合物保存離體心臟的研究
        4.1 引言
        4.2 材料和方法
            4.2.1 材料
            4.2.2 方法
                4.2.2.1 保存液的配制
                4.2.2.2 離體心臟模型的構(gòu)建及心肌細胞的保存
                4.2.2.3 電鏡標本的制作與超微結(jié)構(gòu)觀察
        4.3 結(jié)果與討論
    第五章 偶聯(lián)復(fù)合物在缺血再灌注方面的初步研究
        5.1 引言
        5.2 材料和方法
            5.2.1 材料
            5.2.2 家兔缺血再灌注實驗
            5.2.3 大鼠失血性休克實驗
        5.3 結(jié)果與討論
            5.3.1 家兔血液生化分析
            5.3.2 大鼠血常規(guī)分析
            5.3.3 大鼠血液血氣分析
            5.3.4 動力學參數(shù)的變化
小結(jié)
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]聚合牛血紅蛋白抗原性的初步研究[J]. 陳琳,王鶴堯,卜鳳榮.  免疫學雜志. 2000(01)
[2]雙阿斯匹林交聯(lián)分子血紅蛋白在出血性休克中的應(yīng)用[J]. 宋立強.  國外醫(yī)學(創(chuàng)傷與外科基本問題分冊). 1998(02)



本文編號：3696420