慢性髓性白血病（Chronic Myelogenous Leukemia,CML）是一種常見的骨髓干細(xì)胞惡性增生性疾病,發(fā)病率居各種白血病第三位,僅次于急性粒細(xì)胞性白血�。ˋGL）和急性淋巴細(xì)胞性白血�。ˋLL）,約60-70%患者死于慢性急變,絕大多數(shù)慢性髓性白血病患者的白細(xì)胞中都有細(xì)胞學(xué)標(biāo)志物Ph染色體,該染色體為9號染色體與22號染色體發(fā)生部分遺傳物質(zhì)易位形成的,同時也形成兩種融合基因即ABL/BCR和BCR/ABL,后一種基因可以表達(dá)出分子量為210 KDa的微量融合蛋白(P₂₁₀^bcr/abl)。在95%以上的慢性髓性白血病融合蛋白是呈陽性的,檢測P₂₁₀^bcr/abl蛋白可以準(zhǔn)確和特異地診斷慢性髓性白血病�；谶@種理論我們建立了這一研究課題。 本研究的目的是建立一種新的適合于我們實驗室條件的新技術(shù),檢測外周血白細(xì)胞內(nèi)的P₂₁₀^bcr/abl蛋白,為臨床提供特異、靈敏、快速診斷慢性髓性白血病的新方法。方法是從外周血中收集白細(xì)... 

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 髓性白血病(CML)臨床表現(xiàn)
    1.2 慢性髓性白血病(CML)最大遺傳標(biāo)志
    1.3 費(fèi)城染色體及其表達(dá)產(chǎn)物 P210~(bcr/abl)在CML發(fā)病中的分子機(jī)制
        1.3.1 c-abl 蛋白的正常結(jié)構(gòu)及生化特性、生物學(xué)功能
        1.3.2 bcr 蛋白正常結(jié)構(gòu)及生化特性的生物學(xué)功能
        1.3.3 bcr/abl 蛋白在 CML 發(fā)病中的作用
    1.4 目前有關(guān)慢性髓性白血病臨床診斷方法簡介
    1.5 本研究所涉及的分離技術(shù)方法簡介
        1.5.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)（SDS-PAGE）
            1.5.1.1 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離原理
            1.5.1.2 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測定原理
        1.5.2 蛋白印跡轉(zhuǎn)移電泳
            1.5.2.1 蛋白印跡轉(zhuǎn)移電泳應(yīng)用
            1.5.2.2 蛋白印跡轉(zhuǎn)移電泳分離原理
            1.5.2.3 蛋白印跡轉(zhuǎn)移電泳固相支持
            1.5.2.4 印跡轉(zhuǎn)移電泳的儀器裝置
            1.5.2.5 印跡轉(zhuǎn)移后固相紙膜的測
    1.6 有關(guān)慢性髓性白血病的熱點(diǎn)問題
    1.7 本文研究的目的和意義
第二章 檢測外周血白細(xì)胞 BCR/ABL 基因表達(dá)產(chǎn)物的實驗報告
    2.1 實驗材料
        2.1.1 材料來源
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 實驗藥品
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 白細(xì)胞的收集方法
            2.2.1.1 抗凝血的采集
            2.2.1.2 收集白細(xì)胞
            2.2.1.3 K562 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 BCR/ABL 基因產(chǎn)物的分離—SDS—不連續(xù)系統(tǒng)板狀凝膠電泳
            2.2.2.1 SDS 聚丙酰胺凝膠電泳分離操作步驟
                2.2.2.1.1 裝板
                2.2.2.1.2 配膠
                2.2.2.1.3 凝膠液的灌注和聚合
                2.2.2.1.4 蛋白質(zhì)樣品的處理
                2.2.2.1.5 加樣
                2.2.2.1.6 電泳
                2.2.2.1.7 剝膠和固定
                2.2.2.1.8 染色、脫色
        2.2.3 蛋白印跡電泳操作過程
            2.2.3.1 準(zhǔn)備工作
            2.2.3.2 安裝轉(zhuǎn)移裝置
            2.2.3.3 轉(zhuǎn)移電泳
            2.2.3.4 對固定于纖維素濾膜上的蛋白質(zhì)進(jìn)行染色
            2.2.3.5 封閉硝酸纖維素濾膜的免疫球蛋白結(jié)合位點(diǎn)
            2.2.3.6 硝酸纖維素濾膜進(jìn)行免疫結(jié)合
            2.2.3.7 印跡檢測過程
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 實驗結(jié)果
        3.1.1 SDS-PAGE 分離結(jié)果
        3.1.2 蛋白印跡轉(zhuǎn)移結(jié)果
        3.1.3 對 ECL Western blotting 方法的靈敏度進(jìn)行檢測
        3.1.4 臨床檢測結(jié)果
    3.2 討論
        3.2.1 臨床應(yīng)用結(jié)果的討論
        3.2.2 方法建立涉及的幾個問題
        3.2.3 本方法與目前幾種診斷 CML 的方法的比較
        3.2.4 目前檢測 CML 常用的三種方法比較
        3.2.5 創(chuàng)新點(diǎn)
        3.2.6 聚丙烯酰胺凝膠電泳操作中出現(xiàn)的問題及解決方法
        3.2.7 采用印跡轉(zhuǎn)移電泳法應(yīng)注意的幾個問題
第四章 結(jié)論
附錄 英文單詞縮寫表
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3686687