[目的]本文旨在篩選出可調(diào)控腸道Ⅰ細(xì)胞表達(dá)膽囊收縮素（cholecystokinin,CCK）的大腸桿菌代謝物,建立可方便檢測(cè)CCK表達(dá)的STC-1細(xì)胞模型。[方法]利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建含有CCK啟動(dòng)子調(diào)控?zé)晒馑孛傅穆《据d體,包裝慢病毒并感染STC-1細(xì)胞,獲得STC-1/CCK-Luc細(xì)胞系。用大腸桿菌基因敲除株培養(yǎng)液上清處理上述細(xì)胞,檢測(cè)熒光素酶活性,確定可影響CCK表達(dá)的大腸桿菌基因及代謝產(chǎn)物。使用純化的代謝產(chǎn)物處理STC-1細(xì)胞及腸道類器官,通過(guò)Western blot及免疫熒光法檢測(cè)CCK表達(dá)水平的變化。[結(jié)果]酶切鑒定及DNA測(cè)序表明慢病毒載體構(gòu)建成功,熒光素酶活性檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大腸桿菌ΔSapD株菌液上清可顯著抑制熒光素酶的表達(dá)。敲除SapD基因可以使培養(yǎng)液中腐胺水平下降,而腐胺可以上調(diào)STC-1細(xì)胞及腸道類器官中CCK的表達(dá)。[結(jié)論]成功構(gòu)建了能夠體外檢測(cè)CCK表達(dá)的細(xì)胞系,篩選出1個(gè)能夠調(diào)控CCK表達(dá)的大腸桿菌突變體。 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 慢病毒載體構(gòu)建及細(xì)胞系建立
        1.2.1 慢病毒載體構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 慢病毒包裝及感染目的細(xì)胞
        1.2.3 Peptone-A驗(yàn)證STC-1/CCK-Luc活性
    1.3 大腸桿菌敲除株(ΔSapD)菌液上清對(duì)CCK表達(dá)的影響
        1.3.1 大腸桿菌ΔSapD株的鑒定
        1.3.2 大腸桿菌ΔSapD株菌液上清對(duì)CCK表達(dá)的影響
    1.4 腐胺影響CCK表達(dá)的機(jī)制研究
        1.4.1 腐胺處理STC-1細(xì)胞后CCK表達(dá)水平的檢測(cè)
        1.4.2 腐胺處理腸道類器官后CCK表達(dá)水平的檢測(cè)
    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
    2.2 重組慢病毒包裝及穩(wěn)定感染細(xì)胞系的建立
    2.3 大腸桿菌敲除株ΔSapD的鑒定及其代謝產(chǎn)物對(duì)CCK表達(dá)的影響
    2.4 腐胺對(duì)CCK表達(dá)的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腸道菌群失調(diào)誘導(dǎo)肥胖發(fā)生發(fā)展的機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 許文琦,王生,王艷,梅其炳,劉莉.  世界臨床藥物. 2018(06)
[2]腸類器官的研究與應(yīng)用[J]. 高云,趙九龍,高俊,鄒多武,陳若華.  國(guó)際消化病雜志. 2017(02)



本文編號(hào)：3685043