[目的]本文旨在篩選出可調(diào)控腸道Ⅰ細胞表達膽囊收縮素（cholecystokinin,CCK）的大腸桿菌代謝物,建立可方便檢測CCK表達的STC-1細胞模型。[方法]利用分子克隆技術(shù)構(gòu)建含有CCK啟動子調(diào)控?zé)晒馑孛傅穆《据d體,包裝慢病毒并感染STC-1細胞,獲得STC-1/CCK-Luc細胞系。用大腸桿菌基因敲除株培養(yǎng)液上清處理上述細胞,檢測熒光素酶活性,確定可影響CCK表達的大腸桿菌基因及代謝產(chǎn)物。使用純化的代謝產(chǎn)物處理STC-1細胞及腸道類器官,通過Western blot及免疫熒光法檢測CCK表達水平的變化。[結(jié)果]酶切鑒定及DNA測序表明慢病毒載體構(gòu)建成功,熒光素酶活性檢測發(fā)現(xiàn)大腸桿菌ΔSapD株菌液上清可顯著抑制熒光素酶的表達。敲除SapD基因可以使培養(yǎng)液中腐胺水平下降,而腐胺可以上調(diào)STC-1細胞及腸道類器官中CCK的表達。[結(jié)論]成功構(gòu)建了能夠體外檢測CCK表達的細胞系,篩選出1個能夠調(diào)控CCK表達的大腸桿菌突變體。 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 慢病毒載體構(gòu)建及細胞系建立
        1.2.1 慢病毒載體構(gòu)建與鑒定
        1.2.2 慢病毒包裝及感染目的細胞
        1.2.3 Peptone-A驗證STC-1/CCK-Luc活性
    1.3 大腸桿菌敲除株(ΔSapD)菌液上清對CCK表達的影響
        1.3.1 大腸桿菌ΔSapD株的鑒定
        1.3.2 大腸桿菌ΔSapD株菌液上清對CCK表達的影響
    1.4 腐胺影響CCK表達的機制研究
        1.4.1 腐胺處理STC-1細胞后CCK表達水平的檢測
        1.4.2 腐胺處理腸道類器官后CCK表達水平的檢測
    1.5 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果與分析
    2.1 慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
    2.2 重組慢病毒包裝及穩(wěn)定感染細胞系的建立
    2.3 大腸桿菌敲除株ΔSapD的鑒定及其代謝產(chǎn)物對CCK表達的影響
    2.4 腐胺對CCK表達的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]腸道菌群失調(diào)誘導(dǎo)肥胖發(fā)生發(fā)展的機制研究進展[J]. 許文琦,王生,王艷,梅其炳,劉莉.  世界臨床藥物. 2018(06)
[2]腸類器官的研究與應(yīng)用[J]. 高云,趙九龍,高俊,鄒多武,陳若華.  國際消化病雜志. 2017(02)



本文編號：3685043