聚-β-羥基烷酸是微生物代謝過程中產(chǎn)生的貯存物質(zhì)，是制造塑料的新型原料，可被微生物完全降解，利用植物生物反應(yīng)器合成PHA是現(xiàn)在研究熱點。本論文主要研究實驗室擁有的從Pseudomanas菌中克隆的合成PHA的基因組片段，利用生物信息學(xué)方法分析其序列特征，從中找出與PHA合成相關(guān)的基因，并用PCR方法分離這些基因。結(jié)果顯示： 1 使用核酸分析軟件對合成PHA克隆片段的序列進行分析，找到了五個開放閱讀框，其中ORF1、ORF2和ORF3在同源性搜索中與合成PHA相關(guān)基因的同源性很高，而ORF4、ORF5與PHA合成的基因幾乎沒有同源性。 2 對與ORF1、ORF2和ORF3高度同源性的蛋白序列進行序列比對分析，表明它們與合成PHA的相關(guān)基因編碼的蛋白序列之間存在高度的保守性，它們的功能可能分別對應(yīng)于PHA合酶（PhaC）、3-酮硫裂解酶（PhaA）和乙酰乙酰CoA還原酶（PhaB）。其中PHA合酶與其它Pseudomonas菌中的PHA合酶在蛋白質(zhì)序列上存在較大的差異，可能是一種新的PHA合酶。 3 ... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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英文摘要
引言
    1 聚-β-羥基烷酸生物合成研究進展
    2 本實驗研究內(nèi)容、意義及技術(shù)路線
材料和方法
    1 試驗材料
    2 儀器設(shè)備和試劑
    3 方法
結(jié)果與分析
    1 含PHA基因的基因組DNA片段的測序及序列分析
        1.1 測序
        1.2 測序的質(zhì)量分析
        1.3 開放閱讀框ORF抽提
            1.3.1 開放閱讀框的抽提
            1.3.2 開放閱讀框的蛋白質(zhì)序列
        1.4 開放閱讀框ORF的同源性及序列比對分析
            1.4.1 ORF1的同源性及序列比對分析
            1.4.2 ORF2的同源性及序列比對分析
            1.4.3 ORF3的同源性及序列比對分析
            1.4.4 ORF4的同源性分析
            1.4.5 ORF5的同源性分析
        1.5 轉(zhuǎn)錄啟動子區(qū)的預(yù)測
    2 phaA、phaB和phaC基因的分離
        2.1 phaA、phaB和phaC的PCR擴增
            2.1.1 Pseudomanas sp．基因組DNA的提取
            2.1.2 phaA的引物設(shè)計及PCR擴增
            2.1.3 phaB的引物設(shè)計及PCR擴增
            2.1.4 phaC的引物設(shè)計及PCR擴增反應(yīng)
        2.2 phaA、phaB和phaC的純化及其與pGEM-T載體的連接
            2.2.1 擴增片段純化
            2.2.2 PCR擴增片段與pGEM-T載體連接
            2.2.3 改良法提取質(zhì)粒DNA
            2.2.4 重組子外源片段的酶切驗證
    3 植物種子特異性表達載體pBI121-7S構(gòu)建
        3.1 7S片段與無啟動子的pBI121片段的分離純化
        3.2 7S片段與無啟動子的pBI121片段連接、轉(zhuǎn)化與酶切篩選
討論
結(jié)論
參考文獻
致謝
作者簡介
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人類SR蛋白超家族新成員——SFRS12（SRrp508）的基因克隆和特性分析[J]. 張德禮,孫曉靜,凌倫獎,陳潤生,馬大龍.  遺傳學(xué)報. 2002(05)
[2]基因組數(shù)據(jù)的處理[J]. 胡德華,方平.  生物技術(shù)通訊. 2000(01)
[3]功能基因組學(xué)的研究內(nèi)容與方法[J]. 趙劍華,王秀琴,劉芝華,吳.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2000(01)
[4]ALCALIGENES EUTROPHUS利用不同有機酸生產(chǎn)聚β-羥基烷酸的比較研究[J]. 金大勇,陳堅,倫世儀.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 1999(02)
[5]3-酮硫裂解酶基因phbA的克隆、序列分析及功能檢測[J]. 葉梁,李樅,宋艷茹.  科學(xué)通報. 1999(04)
[6]phbB、phbC基因在大腸桿菌中的表達及對馬鈴薯植株的轉(zhuǎn)化和檢測[J]. 雍偉東,梁鐵兵,謝安勇,李樅,宋艷茹.  植物學(xué)報. 1998(07)
[7]真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌聚羥基烷酸合成酶基因在歐文氏菌中的表達[J]. 田杰生,李季倫.  生物工程學(xué)報. 1997(03)
[8]羥基脂肪酸聚酯產(chǎn)生菌選育[J]. 王武，陳富強，李禮堯.  無錫輕工大學(xué)學(xué)報. 1996(04)
[9]球形紅桿菌積累聚β-羥基鏈烷酸（PHA）的研究[J]. 錢新民,王宇新,常鐘.  微生物學(xué)報. 1995(06)
[10]真養(yǎng)產(chǎn)堿桿菌突變株65－7產(chǎn)羥基丁酸與羥基戊酸共聚物的研究[J]. 翁維琦，易祖華，黃和容，陳琦.  微生物學(xué)通報. 1995(05)



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