基因工程抗體具有廣闊的應(yīng)用前景，但其臨床用藥量相當(dāng)大，如治療B細(xì)胞淋巴瘤的抗CD20抗體（Rituxan），一個療程用藥量約為1.2 g；應(yīng)用于乳腺癌的抗HER2抗體（Herceptin），一個療程用藥量約為0.88 g。而目前制約抗體大規(guī)模應(yīng)用的最大障礙是抗體的產(chǎn)量。本課題旨在探索提高抗體基因表達(dá)的策略，主要工作及結(jié)果如下： 一、含突變neo基因的高效表達(dá)載體的構(gòu)建及熱點整合 1、通過PCR方法對新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶（neo）基因進(jìn)行點突變，構(gòu)建成含Anti-Her2-scFv-Fc-IL-2融合蛋白和突變neo基因（mneo）雙順反子表達(dá)載體，實現(xiàn)了融合蛋白和neo基因在CHO細(xì)胞中的共表達(dá)。 2、含有mneo基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞G418抗性顯著降低，而融合蛋白表達(dá)水平明顯高于含野生型neo細(xì)胞的高表達(dá)克隆，表達(dá)量約達(dá)3μg／ml，且細(xì)胞生長狀態(tài)和目的蛋白表達(dá)水平均十分穩(wěn)定，表明目的基因已經(jīng)穩(wěn)定地整合于宿主細(xì)胞染色體熱點位置。此設(shè)計方案不僅大大提高了外源基因的表達(dá)量，且極大地降低了篩選陽性克隆的勞動強度。 ... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 弱化neo基因-熱點整合:抗體融合蛋白強勢表達(dá)克隆的高效篩選
    第一章 抗體融合蛋白-neo基因突變體雙順反子真核表達(dá)載體的構(gòu)建
        材料
        方法
        結(jié)果
    第二章 穩(wěn)定表達(dá)抗體融合蛋白克隆的高效篩選
        材料
        方法
        結(jié)果
        討論
第二部分 鼠抗體基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列數(shù)據(jù)庫的建立
    第一章 鼠抗體基因調(diào)控區(qū)序列的分析
        材料與方法
        結(jié)果和討論
    第二章 鼠抗體基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)序列數(shù)據(jù)庫的建立
        材料與方法
        結(jié)果
        討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
英文縮略語表
文獻(xiàn)綜述
附錄
    1 、 碩士期間投出文章
    2 、 碩士期間獲得的獎勵
    3 、 申請專利



本文編號：3681733