發(fā)布時間：2022-07-12 19:51

　　副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，Vp）為一種嗜鹽性弧菌，能導(dǎo)致人類食物中毒和旅游者腹瀉，還能導(dǎo)致反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、心臟疾病等。而臨床上檢測到的致病茵大多具有溶血現(xiàn)象（亦稱神奈川現(xiàn)象），基因水平研究發(fā)現(xiàn)該類病原體都攜帶tdh基因，編碼TDH。本研究應(yīng)用基因工程技術(shù)克隆了tdh基因，并讓其在原核表達載體pTrc99A上、經(jīng)IPTG誘導(dǎo)得到高效表達，獲得重組抗原，制備抗-TDH抗體；突變了TDH的Trp65→Ala65，期望構(gòu)建出針對TDH的基因工程疫苗候選株。 設(shè)計一對引物，采用PCR技術(shù)擴增tdh基因，用限制性內(nèi)切酶消化tdh、pUC19和pTrc99A，連接并轉(zhuǎn)化宿主菌JM109，篩選并鑒定出重組質(zhì)粒tdh/pUC19，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院完成序列測定。再亞克隆至pTrc99A上，構(gòu)建出重組質(zhì)粒tdh/pTrc99A。發(fā)酵重組菌tdh/pTrc99A/JM109，條件優(yōu)化后，tdh基因在pTrc99A上，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達。SDS-PAGE分析表明tdh基因得到高效、可溶、非融合性表達；溶血試驗證明該表達產(chǎn)物具有溶血活性。表達產(chǎn)物經(jīng)超濾濃縮、硫酸銨分級沉淀、... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的克隆研究
    1. 實驗材料
    2. 實驗方法
    3. 實驗結(jié)果
    4. 分析與討論
    5. 小結(jié)
第二部分 副溶血性弧菌直接溶血毒素基因的突變研究
    1. 實驗材料
    2. 實驗方法
    3. 實驗結(jié)果
    4. 分析與討論
    5. 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
致謝
文獻綜述
附件
    1. 重組質(zhì)粒tdh/pUC19的正向序列
    2. 重組質(zhì)粒tdh/pUC19的正向序列
    3. 重組質(zhì)粒tdhm/pUC19的序列（Ⅰ）
    4. 重組質(zhì)粒tdhm/pUC19的序列（Ⅱ）
    5. 攻讀碩士期間已發(fā)表和修回的文章


【參考文獻】：
期刊論文
[1]惡性瘧原蟲組氨酸富集蛋白Ⅱ抗原基因在大腸桿菌中的表達及表達蛋白的活性鑒定研究[J]. 方建民,余新炳,羅樹紅,王善青,蔡賢錚,潘波.  中國人獸共患病雜志. 1999(01)



本文編號：3659742