發(fā)布時間：2017-05-14 11:17

  本文關鍵詞：人腦膠質(zhì)瘤模型中腫瘤血管壁的構建及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:利用雙色熒光蛋白示蹤的人腦膠質(zhì)瘤模型探討腫瘤血管形成中的細胞融合問題目的:腫瘤血管生成被認為是腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中重要的生物學現(xiàn)象,是決定疾病轉(zhuǎn)歸的重要因素。已經(jīng)證實在體內(nèi)外人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞參與血管形成,但具體機制未明,本實驗旨在探討人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞同宿主細胞相互融合在腫瘤血管形成中重要作用。方法:采用轉(zhuǎn)基因技術建立表達紅色熒光蛋白(RFP)的人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞SU3-RFP,同宿主表達綠色熒光蛋白(GFP)的裸小鼠構建人腦膠質(zhì)瘤原位移植模型,用組織壓片、切片的方法,利用熒光顯微鏡和熒光掃描激光共聚焦顯微鏡觀察宿主正常腦組織和移植瘤組織中的血管形態(tài)和組成血管的組織細胞結構。結果:在正常腦組織,壓片法可見到類似于注射了血管造影劑樣清晰的各級血管的形態(tài),并根據(jù)組織部位,可大致判斷血管的形態(tài)學特征;在腫瘤組織,壓片法可見到紅色的腫瘤血管,綠色的宿主血管,黃色的腫瘤細胞與宿主細胞共建的血管。在熒光掃描激光共聚焦顯微鏡下觀察腫瘤組織冰凍切片,可分析血管壁的組織結構,無論是內(nèi)皮細胞還是平滑肌細胞都可見由紅色的腫瘤細胞、綠色的宿主細胞和黃色的腫瘤與宿主共建細胞共同組成。結論:轉(zhuǎn)基因熒光蛋白示蹤的可移植性膠質(zhì)瘤模型,在研究膠質(zhì)瘤血管形成時可清晰了解腫瘤組織中的宿主血管、腫瘤血管和腫瘤細胞與宿主細胞共建的血管。在共建血管,除了在同一根血管上可區(qū)分紅色腫瘤細胞與綠色宿主細胞鑲嵌排列的馬賽克血管,還能見到在同一個細胞,既表達RFP又表達GFP的雙陽性(融合)細胞,并且在腫瘤侵襲宿主周圍組織也見到這種反應,據(jù)此表明細胞融合是腫瘤血管形成的重要途徑。第二部分:骨髓間充質(zhì)干細胞同膠質(zhì)瘤干祖細胞體外共培養(yǎng)研究腫瘤血管形成中的細胞融合問題目的:獲取自身表達綠色熒光蛋白(GFP)的近交裸小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞MSCs,體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)并鑒定其生物學特性,同轉(zhuǎn)染紅色熒光蛋白(RFP)基因的人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞SU3-RFP體外共培養(yǎng)探討兩種細胞融合反應對腫瘤血管形成的驅(qū)動作用。方法:體外培養(yǎng)轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)基因的裸小鼠MSCs,利用測CCK-8生長曲線、集落形成實驗、制備染色體、Rt-PCR、免疫細胞化學、流式細胞等技術觀察并鑒定骨髓間充質(zhì)細胞MSCs,取轉(zhuǎn)染紅色熒光蛋白(RFP)基因的人腦膠質(zhì)瘤干祖細胞SU3-RFP與轉(zhuǎn)染綠色熒光蛋白(GFP)基因的綠色裸小鼠MSCs,進行體外共培養(yǎng),在熒光顯微鏡觀察融合細胞的增殖特性,并利用CCK-8生長曲線、Rt-PCR、免疫細胞化學、流式細胞技術和轉(zhuǎn)分化實驗來研究融合細胞的生物學特性及形成腫瘤血管的能力。結果:MSCs在體外連續(xù)傳代培養(yǎng)5代,高增殖活性基本不變,且表達CD105,不表達nestin、CD31,其生物學和遺傳學特征穩(wěn)定。隨著MSCs與SU3-RFP細胞共培養(yǎng)時間的延長和傳代次數(shù)的增加,RFP+/GFP+黃色融合細胞的比例明顯增加。經(jīng)流式細胞儀篩選純化,RFP+/GFP+黃色融合細胞占83.7%±4.5%。其高增殖能力長期保持不變,且通過Rt-PCR、免疫細胞化學、流式細胞技術表明其確實為融合細胞,而非兩種細胞熒光重疊,且在體外能轉(zhuǎn)分化為類內(nèi)皮樣細胞,具備形成腫瘤血管的能力。結論:宿主骨髓間充質(zhì)細胞MSCs在前5代保持穩(wěn)定的生物學和遺傳學特性,其與膠質(zhì)瘤干祖細胞SU3-RFP能在體外培養(yǎng)中發(fā)生融合反應,且融合細胞驅(qū)動腫瘤血管生成。
【關鍵詞】：膠質(zhì)瘤干祖細胞 腫瘤血管生成 熒光蛋白示蹤腫瘤模型 細胞融合 熒光示蹤 細胞融合 膠質(zhì)瘤干細胞 間充質(zhì)干細胞 腫瘤血管生成
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R739.4;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 序言10-14
• 參考文獻12-14
• 第一部分：利用雙色熒光蛋白示蹤的人腦膠質(zhì)瘤模型探討腫瘤血管形成中的細胞融合問題14-27
• 引言14
• 材料和方法14-18
• 結果18-23
• 討論23-25
• 參考文獻25-27
• 第二部分：骨髓間充質(zhì)干細胞同膠質(zhì)瘤干祖細胞體外共培養(yǎng)研究腫瘤血管形成中的細胞融合問題27-48
• 引言27
• 材料和方法27-35
• 結果35-44
• 討論44-45
• 參考文獻45-48
• 結論48-49
• 綜述49-57
• 參考文獻53-57
• 中英文縮寫詞57-58
• 攻讀碩士學位期間公開發(fā)表的論文58-59
• 致謝59-61

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黃暢;朱文彪;朱海林;汪保和;王綺如;;小鼠骨髓內(nèi)皮細胞系的長期傳代培養(yǎng)和生物學特性鑒定[J];中國實驗血液學雜志;2007年06期

  本文關鍵詞：人腦膠質(zhì)瘤模型中腫瘤血管壁的構建及其機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：365043