目的利用枯草桿菌芽孢展示外源蛋白的呈遞技術(shù),研究表面展示鼠疫菌保守抗原F1蛋白的重組芽孢,分析評價重組芽孢的免疫原性。方法將枯草桿菌CotB基因構(gòu)建到pDG1664質(zhì)粒,再將鼠疫菌保守序列F1蛋白編碼基因連接到CotB基因的下游,構(gòu)建成重組質(zhì)粒。然后將外源基因CotB-F1同源重組整合到PY-79枯草桿菌基因組中。經(jīng)PCR、Western Blot方法鑒定重組芽孢中鼠疫F1蛋白的表達(dá)。用上述重組芽孢以無佐劑口服方式免疫小鼠。采用ELISA方法檢測重組芽孢免疫小鼠的免疫效果。結(jié)果本研究制備出表面表達(dá)CotB-F1融合蛋白的重組枯草桿菌芽孢。用重組芽孢和野生型芽孢口服免疫BALB/c小鼠。實(shí)驗結(jié)果表明,重組芽孢免疫組產(chǎn)生了針對鼠疫F1抗原的特異性抗體。重組芽孢免疫小鼠能產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答。結(jié)論本研究制備出表面展示鼠疫F1蛋白的枯草桿菌芽孢,建立了枯草桿菌芽孢呈遞技術(shù)方法,為發(fā)展口服鼠疫疫苗奠定了基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 重組質(zhì)粒pDG1664-CotB質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.3 目的基因F1片段的擴(kuò)增及純化
    1.4 重組枯草桿菌RCotB-F1的構(gòu)建
    1.5 重組枯草桿菌芽孢的制備及形態(tài)學(xué)鑒定
    1.6 重組芽孢16S rRNA基因序列測定
    1.7 SDS-PAGE及Western blot鑒定重組菌株表面表達(dá)蛋白
    1.8 免疫熒光及流式方法鑒定重組菌
    1.9 ELISA檢測血清抗體水平
2 結(jié) 果
    2.1 重組菌株RCotB-F1的構(gòu)建
    2.2 重組枯草桿菌芽孢的制備及形態(tài)學(xué)鑒定
    2.3 重組芽孢16S rRNA基因序列測定
    2.4 Western Blot鑒定重組菌株表面表達(dá)蛋白
    2.5 免疫熒光及流式方法鑒定重組枯草桿菌芽孢
    2.6 ELISA檢測血清抗體水平
3 討 論



本文編號：3648007