目的 構(gòu)建人轉(zhuǎn)化生長因子β₃的真核表達(dá)載體pcDNA3.1（一）/TGFβ₃,以及該重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染NIH3T3成纖維細(xì)胞的穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng),檢測(cè)TGFβ₃基因在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)和該系統(tǒng)細(xì)胞的生長增殖性狀。方法 利用重組DNA技術(shù)和限制性內(nèi)切酶酶切構(gòu)建并鑒定真核表達(dá)載體pcDNA3.1（一）/TGFβ₃。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)和G418細(xì)胞篩選法,將所構(gòu)建的重組質(zhì)粒導(dǎo)入NIH3T3成纖維細(xì)胞,構(gòu)建TGFβ₃轉(zhuǎn)基因NIH3T3成纖維細(xì)胞系,應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)hTGFβ₃在真核細(xì)胞中的表達(dá)。經(jīng)四唑藍(lán)比色實(shí) 驗(yàn)法（MTT）分別對(duì)hTGFβ₃重組質(zhì)粒穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞組、空載體組和NIH3T3對(duì)照組進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳及測(cè)序證實(shí),酶切片段與GenBank中登記的TFGFβ₃全長序列相同,pcDNA3.1（一）/TGFβ₃酶切片段的長度與理論大小相符。在10株轉(zhuǎn)染和經(jīng)G418反復(fù)篩選的NIH3T3... 

【文章來源】：汕頭大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

酶切分析圖

汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生畢業(yè)論文:隨機(jī)選擇10個(gè)經(jīng)反復(fù)篩選典型的轉(zhuǎn)染細(xì)胞集分析與鑒定。結(jié)果顯示，在10株轉(zhuǎn)染pDcNA3.1G7株細(xì)胞的電泳結(jié)果可見一條明顯約267bp條的約26b7p條帶或無(圖6)，而非轉(zhuǎn)染組和載體，550bp的p一actni條帶明顯。說明轉(zhuǎn)基因hT成功。

圖5R--TCPR擴(kuò)增轉(zhuǎn)染細(xì)胞TGFp3基因電泳結(jié)果轉(zhuǎn)染peDNA3.z卜)一兀Fp3重組質(zhì)粒細(xì)胞系3非轉(zhuǎn)RPorduestwithPrimesrorfmhTGFp3oftransfeetedIH3T3fiborblasstrtansefetedwithpeDNA3.1(一)一TGFpetd

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3612099