發(fā)布時間：2022-01-24 08:52

　　目的：建立簡便、快速、可靠的分離純化全血中基因組DNA的方法，以便能在普通的臨床實驗室使用和推廣。 方法：采用不完全溶血劑STMT處理全血樣品，異硫氰酸胍裂解白細胞核，硅膠特異性吸附釋放出來的DNA，漂洗液洗去硅膠上非DNA成分，最后用TE把DNA從硅膠上洗脫下來。對所建立的方法的實驗條件包括異硫氰酸胍（GuSCN）濃度、結(jié)合液pH值、結(jié)合溫度等進行優(yōu)化，從而得到高質(zhì)量的DNA溶液，建立異硫氰酸胍-硅膠法。并對所建立的方法通過以下幾方面進行評價，包括DNA的產(chǎn)量、DNA的純度、DNA的完整性、RNA的污染、重復(fù)性，以及將純化產(chǎn)物應(yīng)用于PCR反應(yīng)和限制性內(nèi)切酶消化，并與傳統(tǒng)的SDS-蛋白酶K/苯酚-氯仿（簡稱酚-仿）法進行比較。 結(jié)果： 1、異硫氰酸胍（GuSCN）濃度、結(jié)合液pH值和結(jié)合溫度等影響異硫氰酸胍-硅膠法的提取效率。其最佳條件是GuSCN濃度為4M、結(jié)合液pH值為6.5、結(jié)合溫度為37℃。 2、異硫氰酸胍-硅膠法提取DNA平均含量（3.7μg/100μl全血）高于酚-仿法（2.99μg/100μl全血）（p＜0.05），純度（OD260/OD280 1... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：51 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因組DNA電泳結(jié)果

同時同條件對異硫氰肌酸一硅膠法和酚一仿法制備的DNA的第巧號染色體的CSK基因外顯子I進行擴增，引物設(shè)計擴增片段為287bp，經(jīng)聚丙烯酞胺凝膠電泳后與標準分子量比較，該片段與預(yù)計片段的大小一致(見圖3一9)。蝴黝助徹4O0鉚劃心圖3一9兩種方法提取DNA的PCR結(jié)果1一4:異硫氰酸肌一硅膠法提取DNA的PCR結(jié)果5一8:酚一仿法提取DNA的PCR結(jié)果M:100bPladder

【參考文獻】：
期刊論文
[1]一種碘化鉀提取外周血基因組DNA的方法[J]. 趙書平,張俊潔,尤建,楊玉紅,郭峰.  中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志. 1999(06)
[2]鹽析法快速抽提外周血DNA方法的改進[J]. 劉華欣,王承志,潘自鐵,王曉玉,姚敏捷.  空軍醫(yī)高專學(xué)報. 1999(01)
[3]快速鹽析法提取DNA在HLA基因分型中的應(yīng)用[J]. 譚建明,謝桐,徐琴君,徐達,王祥慧,丁言德.  中華器官移植雜志. 1996(01)
[4]介紹一種簡便快速的可供臨床實驗室使用的DNA提取、純化方法[J]. 秦秋平.  生命的化學(xué)(中國生物化學(xué)會通訊). 1991(03)



本文編號：3606281