目的克隆多房棘球絳蟲(chóng)（Echinococcus multilocularis,Em）硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶（Thioredoxin peroxidase, TPx）基因,構(gòu)建原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)EmTPx蛋白,并初步評(píng)價(jià)其免疫診斷價(jià)值。方法從沙鼠中分離多房棘球絳蟲(chóng)原頭蚴,提取總RNA,采用RT-PCR方法獲取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表達(dá)載體pET-28a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-EmTPx,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21進(jìn)行目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及純化,免疫小鼠制備抗EmTPx重組蛋白（rEmTPx）的多抗血清。通過(guò)Western blot對(duì)rEmTPx的免疫學(xué)特性進(jìn)行鑒定,通過(guò)間接ELISA試驗(yàn)評(píng)價(jià)其免疫診斷價(jià)值。結(jié)果 PCR擴(kuò)增EmTPx基因片段長(zhǎng)度為582 bp,測(cè)序證實(shí)重組表達(dá)質(zhì)粒pET-28a-EmTPx構(gòu)建正確,表達(dá)的目的蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為26×10³,與理論值相符。Western blot顯示該蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清識(shí)別,以rEmTPx為抗原采用間接ELISA法檢測(cè)AE患者血清,特異抗體的敏感性為66.2%,特異性為87.5%。結(jié)... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019,14(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

圖１ＥｍＴＰｘ基因的ＰＣＲ擴(kuò)增（Ａ）及重組質(zhì)粒ｐＥＴ２８ａ－ＥｍＴＰｘＭＤＮＡ分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（ＤＬ２０００）

組蛋白的免疫活性鑒定用純化的ＥｍＴＰｘ重組蛋白免疫小鼠，其抗血清效價(jià)持續(xù)升高，兩次加強(qiáng)免疫后的抗體效價(jià)可達(dá)１∶２５６０００（ＥＬＩＳＡ法）。用獲得高效價(jià)血清作為一抗進(jìn)行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，結(jié)果見(jiàn)圖５。ＥｍＴＰｘ重組蛋白和Ｅｍ原頭蚴天然抗原能被抗ＥｍＴＰｘ蛋白多抗血清識(shí)別，說(shuō)明ＥｍＴＰｘ重組蛋白具有免疫原性。Ｍ蛋白分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)１抗ＥｍＴＰｘ蛋白多抗血清與ＥｍＴＰｘ重組蛋白反應(yīng)條帶２Ｅｍ原頭蚴天然蛋白反應(yīng)條帶圖５ＥｍＴＰｘ重組蛋白的免疫活性鑒定（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法）ＭＰｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒｓ１ＥｍＴＰｘｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ２ＥｍｐｒｏｔｏｓｃｏｌｅｃｅｓａｎｔｉｇｅｎＦｉｇ．５ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＥｍＴＰｘｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）５ＥｍＴＰｘ重組蛋白免疫診斷價(jià)值評(píng)價(jià)以純化后的ＥｍＴＰｘ重組蛋白為診斷抗原，通過(guò)間接ＥＬＩＳＡ法檢測(cè)ＡＥ患者血清中的ＥｍＴＰｘ抗體，結(jié)果顯示，以ＲＯＣ曲線法確定ＣＵＴＯＦＦ值為０．３８３５，該抗原診斷的敏感性為６６．２２％（４９／７４），特異性為８７．５０％（２１／２４）。討論棘球蚴侵入人體肝臟等器官寄生后生長(zhǎng)緩慢，往往數(shù)年后才出現(xiàn)臨床癥狀，使得ＡＥ的早期診斷較為困難，且患者一旦確診均已處于中晚期。ＡＥ患者晚期病灶邊緣呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，可侵犯膽道、下腔靜脈、侵蝕鄰近組織器官或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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